哮喘发作与细胞骨架重建相关基因的差异表达论文

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1、哮喘发作与细胞骨架重建相关基因的差异表达论文蔡绍曦，赵海金，丁彦青，李文军，周斌，肖军【关键词】抑制性消减杂交技术；哮喘；嗜酸细胞；细胞支架蛋白质类Differentiallyexpressionofgenesassociatedodelingofperipheralbloodeosinophilsduringasthmaticattack【Abstract】AIM:Todeterminethedifferentiallyexpressedgenesassociatedodelingofperiphera

2、lbloodeosinophils(EOS)inpatientsduringasthmaticattack.METHODS:DoublestrandedcDNAplifiedfromtotalRNAofEOSatthetimeofasthmaticattackandafterimprovementrespectivelybySuperSMARTcDNASynthesistechology,Suppressionsubtractivehybridization(SSH)andPCRselectdiffere

3、ntialscreeningtechnologyologyanalysisologyanalysisidentified6differentiallyexpressedgenesassociatedodeling,includingslingshot2L(SSH2L),PP1catalyticsubunit,betaisoform(PP1Cβ),dedicatorofcytokinesis8(DOCK8),Homosapiensproteintyrosinephosphatasenonreceptorty

4、pe6and12(PTPN6,PTPN12),myosinregulatorylightchaininteractingprotein(MIR).CONCLUSION:Thedifferentiallyexpressedgenesassociatedodelingmayparticipateinexacerbationofasthma.Furtherstudyonthegenesfunctionmayprovideneatreatment.【Keya;eosinophils;cytoskeletalpro

5、teins【摘要】目的：研究外周血嗜酸性粒细胞(EOS)在哮喘发作时与细胞骨架相关基因的差异表达.方法：应用SuperSMARTcDNAsynthesis技术从总RNA合成足量的双链cDNA.经液相杂交消减两组共同序列，以抑制性PCR方式扩增差异表达序列.构建上调与下调cDNA文库，菌落PCR扩增差异片段.freeleinonesecond,FEV1）及气道反应性相关，尤其在持续性及重症哮喘，外周血EOS增多与持续性气流阻塞显著、独立相关［1-2］.细胞骨架重建在细胞黏附，伸展，运动及细胞内众多信号转导调

6、控等过程中发挥重要作用［3］.哮喘患者外周血EOS已经被激活或活化，但其真正分子机制远未清楚，因此我们利用SSH技术研究哮喘患者在发作与缓解时外周血EOS与细胞骨架重建相关基因差异表达，探索其调控分子本质，为哮喘诊治提供帮助.1材料和方法1.1材料分离哮喘患者外周血EOS的Percoll试剂购自瑞典AmershamPharmacia公司；Trizol总RNA分离试剂购自美国Invitrogen公司；SuperSMARTcDNAsynthesis试剂盒及Chromaspin1000depc水纯化柱购自美国C

7、lontech公司.DIG标记和检测试剂为Roche公司DIGHighPrimeDNALabelingandDetectionStarterKitI；构建文库的cDNA来自哮喘患者治疗前与缓解时外周血EOS总RNA经SuperSMARTcDNAsynthesis技术合成［4］.1.2方法1.2.1抑制性消减杂交以治疗前后EOScDNA互为检测子(Tester)和驱动子(Driver).取纯化Tester及Driver的双链cDNA各2μg，分别用限制性内切酶RsaⅠ37℃酶切1.5h，酶切完全后鉴定酶切效

8、率.SSH其他过程按照SSH试剂盒说明及