哮喘发作与细胞骨架重建相关基因的差异表达

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1、哮喘发作与细胞骨架重建相关基因的差异表达作者：蔡绍曦，赵海金，丁彦青，李文军，周斌，肖军【关键词】抑制性消减杂交技术；哮喘；嗜酸细胞；细胞支架蛋白质类　　Differentiallyexpressionofgenesassociatedodelingofperipheralbloodeosinophilsduringasthmaticattack　　【Abstract】AIM:Todeterminethedifferentiallyexpressedgenesassociatedodelingofperiphera

2、lbloodeosinophils(EOS)inpatientsduringasthmaticattack.METHODS:DoublestrandedcDNAplifiedfromtotalRNAofEOSatthetimeofasthmaticattackandafterimprovementrespectivelybySuperSMARTcDNASynthesistechology,Suppressionsubtractivehybridization(SSH)andPCRselectdifferential

3、screeningtechnologyologyanalysisologyanalysisidentified6differentiallyexpressedgenesassociatedodeling,includingslingshot2L(SSH2L),PP1catalyticsubunit,betaisoform(PP1Cβ),dedicatorofcytokinesis8(DOCK8),HomosapiensprotEintyrosinephosphatasenonreceptortype6and12(P

4、TPN6,PTPN12),myosinregulatorylightchaininteractingprotEIn(MIR).CONCLUSION:　Thedifferentiallyexpressedgenesassociatedodelingmayparticipatein　exacerbationofasthma.Furtherstudyonthegenesfunctionmayprovideneatreatment.　　【Keya;eosinophils;cytoskeletalproteins　　【摘要】

5、目的：研究外周血嗜酸性粒细胞(EOS)在哮喘发作时与细胞骨架相关基因的差异表达.方法：应用SuperSMARTcDNAsynthesis技术从总RNA合成足量的双链cDNA.经液相杂交消减两组共同序列，以抑制性PCR方式扩增差异表达序列.构建上调与下调cDNA文库，菌落PCR扩增差异片段，应用差异筛选技术进一步鉴定差异表达基因并测序，结果通过核酸数据库进行同源性比较.结果：构建了高效的上调与下调消减cDNA文库，经鉴定及同源性分析有6个与细胞骨架重建有关，包括上调基因slingshot磷酸酶(SSH2L)，蛋白磷酸

6、酶1β亚型(PP1Cβ)，无功能糖基转移酶样蛋白(DOCK8)，蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6(PTPN6)与非受体型12(PTPN12)；下调基因，肌凝蛋白调节轻链结合蛋白(MIR).结论：这些骨架重建相关基因的差异表达可能参与了哮喘发作，进一步进行功能研究可能为哮喘治疗提供新的作用靶点.　　【关键词】抑制性消减杂交技术；哮喘；嗜酸细胞；细胞支架蛋白质类　　0引言　　哮喘是一种复杂的多基因遗传病，病理上是以伴随淋巴细胞与嗜酸性粒细胞（eosinophils,EOS）浸润为主的慢性炎症性疾病.有证据表明外周血EOS数目

7、与哮喘的症状，一秒用力呼气量（Forcedexpiratoryvolumeinonesecond,FEV1）及气道反应性相关，尤其在持续性及重症哮喘，外周血EOS增多与持续性气流阻塞显著、独立相关［1-2］.细胞骨架重建在细胞黏附，伸展，运动及细胞内众多信号转导调控等过程中发挥重要作用［3］.哮喘患者外周血EOS已经被激活或活化，但其真正分子机制远未清楚，因此我们利用SSH技术研究哮喘患者在发作与缓解时外周血EOS与细胞骨架重建相关基因差异表达，探索其调控分子本质，为哮喘诊治提供帮助.　　1材料和方法　　1.1材料

8、分离哮喘患者外周血EOS的Percoll试剂购自瑞典AmershamPharmacia公司；Trizol总RNA分离试剂购自美国Invitrogen公司；SuperSMARTcDNAsynthesis试剂盒及Chromaspin1000depc水纯化柱购自美国Clontech公司.DIG标记和检测试剂为Roche公司DIGHighPrimeDNALabeli