正交设计法优选老鹰茶总皂苷的提取工艺研究论文

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1、正交设计法优选老鹰茶总皂苷的提取工艺研究论文陆维丽李俊周维晨程文明汤文建【摘要】目的对从老鹰茶中提取总皂苷的工艺进行优化。方法以齐墩果酸为对照品，香草醛-高氯酸法显色，用紫外分光光度法在550nm处测定总皂苷含量。采用L9（34）正交设计，以老鹰茶总皂苷含量为考察指标，考察乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数4个因素对提取的影响。结果最佳提取工艺为80%乙醇，12倍量，回流提取3次，1h/次。结论该工艺经实验重复性好.freelg，置于25ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，即得对照品溶液(每毫升含齐墩果酸标准品0.2m

2、g)。精密量取对照品溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml于10ml试管中，抽干甲醇，加0.2ml5%香草醛，0.8ml高氯酸，摇匀于60℃水浴中加热15min，冷却，加冰醋酸5ml，摇匀。以相应试剂做空白，在8453紫外-可见分光光度计上进行全波长扫描，最大吸收波长为（λmax）550nm。按分光光度法在550nm波长处测定吸光度。以吸光度值(Y)为纵坐标，对照品浓度(X)为横坐标绘图，得回归线性方程Y=53.666X-0.0674，r=0.9999，线性范围：6.6667～33.3333mg·L-

3、1。2.2提取溶剂的选择2.2.1水提取法精密称取老鹰茶5g，加水50ml，在水浴上加热回流提取1h，趁热过滤，共提取2次，洗涤残渣，合并滤液和洗涤液，蒸干溶剂。固体水溶后，正丁醇萃取，萃取液过氧化铝柱，收集流出液，定容至200ml容量瓶中，摇匀，待用。2.2.2乙醇提取法精密称取老鹰茶5g，加80%乙醇50ml，在水浴上加热回流提取1h，趁热过滤，共提取2次，洗涤残渣，合并滤液和洗涤液，蒸干溶剂。固体水溶后，正丁醇萃取，萃取液过氧化铝柱，收集流出液，定容至200ml容量瓶中，摇匀，待用。2.2.3样品中总皂苷的含量

4、测定精密量取供试品溶液0.3ml，按标准曲线方法进行操作，测定吸光度值，由回归方程计算样品中总皂苷的含量。结果见表1。表1提取溶剂与含量的关系（略）2.3正交实验设计与结果根据药材性质和生产实际要求，拟定影响浸出效果的4个主要因素，即A为乙醇浓度(%)，B为乙醇用量(倍体积)，C为提取时间(h/次），D为提取次数，每个因素选择3个水平，编制因素水平表见表2。表2因素水平（略）称取适量老鹰茶干燥粗粉9份，按正交实验设计的工艺进行提取，以老鹰茶提取物中总皂苷含量为考核指标，对正交实验结果进行方差分析见表3～4。表3正交试

5、验(L934)直观分析（略）表4方差分析（略）根据分析结果可知，各个因素对老鹰茶总皂苷提取效果的影响程度依次为A（乙醇浓度）D（提取次数）C（提取时间）B（乙醇用量），且对提取效果影响有统计学意义的因素是因素A（乙醇浓度）。综合直观分析和方差分析的结果，老鹰茶总皂苷理想的提取工艺方案是A3B3C1D3，即用12倍量的80%乙醇，回流提取3次，1h/次。2.4提取工艺的验证实验为进一步考察上述最佳工艺的稳定性和合理性，按该工艺条件进行重复性实验3次，分别测定老鹰茶总皂苷的含量。结果见表5。测定的结果均等于或优于正交实验

6、表中的任何一组，重复性好，RSD=0.934%(n=3)。说明该工艺稳定可行。表5最佳工艺的验证实验（略）3讨论香草醛-高氯酸法显色体系最大吸收波长在550nm处，该显色体系呈色稳定，但由于老鹰茶粗提物中有色物质的干扰，粗提物须经过氧化铝脱色。样品脱色后显色在近550nm处有最大吸收，因此该显色体系可用于老鹰茶总皂苷含量测定。由正交实验的直观分析和方差分析结果可知，从总皂苷这一指标来看，因素A（乙醇浓度）的影响最大，差异性最为显著；老鹰茶总皂苷的最佳提取工艺为12倍量的80%乙醇，回流提取3次，1h/次。本实验优选出

7、的工艺简单，操作容易，稳定性好。【