吸烟者树突状细胞的功能状态研究分析论文

《吸烟者树突状细胞的功能状态研究分析论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、吸烟者树突状细胞的功能状态研究分析论文.freelokingperson.MethodsDCshumanperipherybloodmonocytecells(PBMCs)uponcultureacrophagecolonystimulatingfactor(GM-CSF)fromsmokingperson.Thesurfaceco-stimulatoryfactorCD86(7-2)ofDCsetry.Immunostimulatorycapacityeasuredbymixedlymphocytereaction(MLR).EL

2、ISAoreCD86smokingperson.ThestimulatingcapacityofDCsinMLRphocytesinMLRproducedhigherlevelsofpro-inflammationcytokinesandlomationcytokines.freelalgroup.ConclusionDCsofsmokingpersonareactivated，ayplayanimportantroleintheprogressofatherosclerosis(AS).近年发现免疫炎性反应在促进动脉粥样硬化(at

3、herosclerosis，AS)发病中起重要作用［１］。研究发现体内功能最强的专职性抗原提呈细胞树突状细胞(dendriticcell，DC)在AS斑块中聚集增多，提示其所介导免疫炎性反应参与了AS的发生和发展［２］。吸烟是心脑血管疾病的重要危险因素之一［３］，有观察表明吸烟可激活体内的炎性反应［４］，但吸烟是否影响DC功能从而促进AS的发生与发展，目前尚少有报道。本文通过观察吸烟者DC的功能状态，进一步阐明吸烟致AS的可能机制。1对象与方法1.1研究对象选取吸烟和非吸烟者各30例，两组年龄、性别等无明显差异。所有对象均排除急慢性

4、炎性疾病、自身免疫性疾病及肿瘤，未用激素及免疫抑制剂。1.2材料RPMI1640(L-glutamine)培养基、胎牛血清(FCS)购自Gibco公司；淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物制品有限公司；四唑盐(MTT)、二甲亚砜(DSMO)购自广州威佳公司；重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白介素-4(rhIL-4)购自英国Peprotech公司；PE标记的鼠抗人CD86(B7-2)单抗购自Biolegend公司；白细胞介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)ELISA试剂盒购自美晶公司。1.3方法1

5、.3.1DC制备抽取受试者外周血20ml，淋巴细胞分离液中离心(2000r/min，20min)，收集单个核细胞(PBMC)，PBS冲洗2次，RPMI1640冲洗1次，用完全RPMI1640(含10%FCS)在6孔培养板中培养2h(37℃，5%CO2)，去掉非贴壁细胞。贴壁细胞用完全RPMI1640(含10%FCS、rhGM-CSF100ng/ml、rhIL-4500u/ml)培养液，置37℃、5%CO2温箱中培养7天，隔天半量换液1次。收集培养第7天的悬浮细胞即DC进行实验。1.3.2DC形态于培养第1、3、5、7天在倒置显微镜下

6、观察DC形态。1.3.3流式细胞学分析收集DC细胞，用PE标记的CD86(B7-2)单抗标记细胞，用流式细胞仪(FACS，美国BectonDickinson)检测。1.3.4混合淋巴细胞反应(MLR)反应中淋巴细胞来自其他健康供血员的PBMC，经T细胞尼龙毛柱分离后，得到纯的T淋巴细胞。浓度为2×１０５/ml的T淋细胞与浓度为2×１０４/ml的DC各100μl在96孔平底培养板中37℃、5%CO2条件下混合培养，第4天吸取上清液-20℃保存待测细胞因子，沉淀细胞加MTT液(25μl/孔)，继续培养4h后每孔加DMSO100μl，波长

7、570nm处测A值。1.3.5细胞因子测定酶联免疫吸附法(ELISA法)分别检测保存的混合淋巴细胞反应上清液IL-1β和IL-10浓度，操作严格按试剂盒说明进行。1.4统计学方法应用SPSS10.0软件系统分析，所有资料采用均数±标准差(x±s)表示，组间差异用t检验(Independent-SamplesTtest)。P＜0.05为差异有显著性。2结果2.1DC形态学特点光学显微镜下可见细胞表面伸出树突样结构，长短不一，呈簇状生长，为典型的DC细胞。吸烟者和非吸烟者DC在形态上无差别。2.2吸烟者DC的功能吸烟者DC表面CD86表

8、达明显高于非吸烟者(P＜0.001)，吸烟者DC刺激T淋巴细胞增殖能力显著高于对照组(P＜0.001)。如表1所示。表1吸烟者DC功能(x±s)注：与非吸烟组比较，*Ｐ＜0.0012.3细胞因子测定吸烟者MLR上清液中促炎细胞因子IL