dc与cik共培养对肝癌细胞杀伤活性的研究

《dc与cik共培养对肝癌细胞杀伤活性的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、DC与CIK共培养对肝癌细胞杀伤活性的研究作者：陈宝安，李曼，孙载阳，李翠萍，高冲，孙耘玉【摘要】本研究的目的是观察细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与同源树突状细胞（DC）共培养后DC-CIK细胞的增殖活性、表型的变化，及其对肝癌细胞细胞毒作用的影响。采集健康供者的外周血单个核细胞（MNC），置于37℃，5%CO2培养箱培养2小时，收集非贴壁细胞用于诱导培养CIK细胞，贴壁细胞诱导分化出成熟DC，将成熟DC和CIK细胞按1∶5的比例混合培养3天，用MTT法检测DC-CIK共培养细胞杀伤SMMC-7721肝癌细胞株的活性。结果显示：DC与CIK细

2、胞共培养后，DC-CIK细胞群的增殖活性和杀伤活性较单纯的CIK细胞更高。结论：DC与CIK共培养细胞是一种增殖活性和细胞毒活性均高于CIK细胞的免疫活性细胞。【关键词】肝癌细胞　　KillingActivityinDCandCIKCo-cultureagainstHepatocar-cinomaCells　　AbstractThisstudyedtoinvestigatetheproliferationactivitiesandphenotypechangesofDC，CIKandDC-CIK，andthEircytotoxicityagai

3、nsthepatocarcinomacellsinco-cultureofDCononuclearcells(PBMNC)heathyadultdonors.AfterincubationofPBMNCfor2hours，DCsadherentcellsbysomecytokinesandCIKsnon-adherentcells.MatureDCsacelllineacellsatloacellline，munecells.　　Keymunetherapy　　近年来随着细胞免疫学和分子生物学的发展，恶性肿瘤的细胞免疫治疗已经开始在临床应用，并

4、取得一定疗效。细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokineinducedkillercell，CIK）是一种高效、新型免疫活性细胞，是恶性肿瘤过继免疫治疗的重要手段之一。树突状细胞（dendriticcells，DC）是目前发现的功能最强的抗原呈递细胞（APC），它通过处理、呈递抗原，介导机体免疫应答。由于许多肿瘤宿主缺乏功能性DC而不能诱发抗原特异性T细胞应答，故在体外诱导功能性DC用于主动免疫治疗具有重要的临床应用价值。本实验将成熟DC和CIK细胞共培养，观察DC-CIK细胞群的增殖活性和表型变化，及其对肝癌细胞的体外杀伤作用。　　材料和方法　

5、　主要试剂和仪器　　IMDM完全培养基为Gibco公司产品，10%AB灭活血清为南京红十字血液中心产品，AIM-V无血清培养基为Gibco公司产品，淋巴细胞分离液购自上海第二制药厂，CD3单克隆抗体购自OrthoBiotech公司，IFN-α1b购自上海生物制品研究所，rhIL-2购自Chiron公司，rhGM-CSF，rhIL-1β，rhIL-4，rhIL-6，TNF-α和PGE-2均购自PEPROTech公司，MTT购自R＆DSystems公司）。正常人外周血取于4名健康供者。肝癌细胞株SMMC-7721为本实验室液氮保存株。流式细胞仪为美

6、国BectonDickinson公司产品，透射电镜为HITACHI公司产品。　　CIK细胞的体外诱导和扩增　　通过血细胞分离机从健康供者采集外周血单个核细胞（MNC），用淋巴细胞分离液（Ficoll）分离出MNC，用AIM-V无血清培养基调细胞浓度为（4-6）×106/ml，置于37℃、5%CO2培养箱培养2小时。收集非贴壁细胞，用含10%人AB血清的IMDM调细胞浓度为（1-2）×106/ml，并加入1000U/ml的IFN-α悬浮培养，24小时后加入1μg/ml的CD3单克隆抗体和1000U/ml的rhIL-2，每隔3天半量换液1次，补充r

7、hIL-2，调整细胞浓度始终为（1-2）×106/ml。　　DC的体外培养　　在PBMNC培养2小时之后的贴壁细胞中，加入含1000U/ml的GM-CSF和1000U/ml的IL-4的AIM-V培养液，37℃、5%CO2培养箱培养。每3天换液1次并补充细胞因子，第6天加入上述细胞因子的同时还加入IL-1β、TNF-α、PGE-2等细胞因子诱导DC成熟，共培养8-9天。　　DC与CIK细胞共培养　　收获的DC计数后和CIK按1∶5混合培养，共培养3天。　　CIK及DC-CIK对肿瘤细胞的细胞毒作用的MTT测定　　以培养12天的CIK、DC-CIK

8、共培养物作为效应细胞，SMMC-7721肝癌细胞株为靶细胞。取对数生长期7721肝癌细胞，调整浓度为1×105/ml，CIK、DC-CIK的细胞浓度分