dc-cik细胞对人肝癌细胞周期、凋亡、增殖和迁移的影响研究

《dc-cik细胞对人肝癌细胞周期、凋亡、增殖和迁移的影响研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学硕士学位论文DC--CIK细胞对人肝癌细胞周期、凋亡、增殖和迁移的影响研究姓名：项颖申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：秦波201205DC．cIK细胞对人肝癌细胞周期、凋亡、增殖和迁移的影响研究1摘要目的：研究在各种细胞因子作用下，通过一定的试验方法将从原发性肝癌病人PBMC诱导出的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对人肝癌HEPG2细胞系周期、凋亡、增值、迁移的影响，了解DC—CIK细胞对人肝癌细胞作用的规律，更好地为临床治疗原发性肝癌提供试验基础依据。方法：用原发性肝癌患者肝癌组织裂解物(肿瘤

2、抗原)致敏经GM—CSF、TNF—a及IL一4等诱导该患者PBMC产生的DC。用IFN一¨IL．2和人CD3单克隆抗体等诱导该PBMC的悬浮细胞产生CIK细胞。用TaIlswell培养小室将DC．CIK细胞与HEPG2细胞在同一培养体系内经该小室膜分隔培养24、48h。流式细胞仪检测该HEPG2细胞的周期；Ame)(inV．PI双染法检测其凋亡。RT．PCR、Westemblot分别检测凋亡相关基因Bax及其编码蛋白的表达。CCK一8法检测HEPG2细胞生长变化，并绘制其生长曲线；划痕实验检测其增殖、迁移能力。RT．PCR、West

3、emblot分别检测其增殖细胞核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达。结果：DC．CIK细胞可明显影响人HEPG2细胞生长周期，经两者共同培养，可将HEPG2细胞系阻滞于G1期。DC．CIK细胞能显著诱1本课题受重庆市卫生局科研基金资助，项目批号：csTc2010—2—30l2导HEPG2细胞的凋亡(与对照相比，其凋亡诱导率差异显著，P<0．011。基因与蛋白水平检测表明，DC—CIK细胞可致HEPG2细胞系的凋亡相关基因BaX表达明显上调。CCK一8法检测显示，DC．CIK细胞对人HEPG2细胞生长具显著杀伤作用(与对照细胞比较，P

4、

5、DWITHDENDRITICCELLSoNTHECYCLE，APoPToSIS，PRoLIFERATIoNANDMIGRATIoNoFHEPAToM已父CARCINoⅣ【ACELLSABSTRACTObjectiVe：ToeXploratetheeffectofcytol(ineinducedkiller(CIK)cellaIlddendnticcell(DC)舶mpe订pheralbloodmononuclearcell(PBMC)ofpadentwithprima巧liVercanceronthecycle，印optosis，p

6、rolifera矗onaIld面矿ationofhumanHEPG2cell1ineofliVercaIlcerMethods：ThePBMCwereinducedbyGM-CSF、TNF一仅andIL-4inordertoproduceDC，whichweresensitizedwithaIltigenofautologoustissueofprimarylivercancer．Meanwllile，CIKcellswereobtained白∞mthesuspendedPBMCinducedbyIFN小IL一2andhumaJlC

7、D3monoclonal枷ibody(hCD3mAb)．TheDC，CIKcellsandHEPG2ceU1iIlewereculturedi11as锄ecirculnstancebutdif诧rentpartsofacultllrillgcabinnamedTranswell氨贸24hand48hrespectively．SubsequentlythecycleofhumanHEPG2celllineweretestedbynowcytomeny(FCM)．The加meXinV—PIstajniIlgwas锄ployedtoana

8、lysis廿1eapoptosisoft11esameceUline．TheeXpressionofBaxgenewhichrelatedwitl：1apoptosisofthiscellsanditscodedproteinwere