悦肝胶囊对体外培养肝细胞抗衰老作用的研究论文

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1、悦肝胶囊对体外培养肝细胞抗衰老作用的研究论文朴丽花，金政，李相伍，蔡英兰【关键词】悦肝胶囊；,,衰老；,,大鼠肝细胞摘要：目的探讨悦肝胶囊的抗衰老作用。方法以D半乳糖诱导大鼠肝细胞衰老模型，观察悦肝胶囊对肝细胞的形态结构、组织化学以及对SOD、MDA活性的影响。结果悦肝胶囊可明显降低MDA含量，提高SOD活性；组织化学及超微结构观察表明，模型组SDH活性下降，ACP活性增高.freelodelsistryofrathepatocytesandeffectofSOD,MDAactivitiesistry

2、andultrastructure,itshoitochondrionsedeformed,crestbroke.Yuegancapsulealleviateddenatureddegreeabove.ConclusionTheYueganCapsulehasprotectiveeffectsonDgalactoseinducedinjuryofprimaryculturedrathepatocytes.Keyl即得。D半乳糖为上海试剂二厂产品。（批号为980218）人参皂苷为吉林省白山市靖宇县黄封参

3、药业公司产品，用RPMI1640培养液配成300μg/ml浓度用于实验，新生小牛血清为杭州四季青生物工程公司产品，RPMI1640培养基为日本株式会社产品，胰蛋白酶为美国DIFCO公司产品，胶原酶为美国SIGMA化学公司产品。SOD、MDA试剂盒为南京建成生物工程研究所产品，其他试剂均为国产分析纯。1.3仪器超净工作台为北京昌平长城净化设备厂产品，日本PC23232E型二氧化碳恒温培养箱，日本OLYMPUS倒置显微镜，日本JEM1200EX型透射电镜,日本OLYMPUS万能显微镜,.freell人参皂

4、苷；实验组加入8g/LD半乳糖+500μg/ml悦肝胶囊。作用24h后，模型对照组换接种培养基；药物对照组换加有300μg/ml人参皂苷的培养基；实验组换加有500μg/ml悦肝胶囊的培养基继续培养。1.5细胞化学观察取生长盖玻片，显示SDH、ACPase。SDH显示采用亚铁氰化甲法；ACPase显示采用Gomori法；染色后用日本OLYMPUS万能显微镜观察拍片并利用病理显微分析系统进行定量分析（每组随机选4张盖玻片，每张盖玻片再随机选3个视野，在400×下，测定每个视野颗粒面积百分比）。1.6电镜

5、标本观察取生长良好的培养瓶，按电镜标本制作常规方法制作标本，JEM1200EX型透射电镜观察并拍片。1.7生化测定SOD活性按黄嘌呤氧化酶法；MDA含量按硫代巴比妥酸法［1］。1.8统计学方法所有数据以±s表示，应用SPSS10.0统计软件进行方差分析。2结果2.1超微结构正常组肝细胞核圆，核仁明显，核膜清晰，粗面内质网常成群分布于核周及线粒体周围，呈平行排列。线粒体结构正常。模型组线粒体肿胀变性、嵴消失，溶酶体增多。悦肝胶囊组仍有少数线粒体肿胀、变性改变，但程度较模型组明显减轻。2.2组织化学2.2

6、.1琥珀酸脱氢酶（SDH）染色结果SDH活性在光镜下显示为紫蓝色颗粒。正常组SDH活性强，颗粒多，染色深。模型组SDH活性减弱，紫蓝色颗粒减少，染色浅。药物对照组及药物组SDH活性均较模型组增强，颗粒多，染色深。2.2.2酸性磷酸酶（ACP）染色结果ACP活性呈棕黑色沉淀。正常组ACP活性弱，酶颗粒染色较浅，均匀一致。模型组ACP活性增强，颗粒多，染色深。药物对照组与药物组ACP活性均减弱，颗粒染色较浅。结果见表1。表1各组肝细胞细胞化学染色酶颗粒定量分析结果（略）与正常组比较，#P0.01；与模型组

7、比较，*P0.01；n=122.3生化指标检测结果见表2。表2各组肝细胞SOD、MDA的影响（略）与正常组比较，*P0.01；与模型组比较，#P0.01；n=123讨论衰老“代谢失调学说”是目前被公认的一种衰老学说，据此有人研究出D半乳糖亚急性衰老模型。D半乳糖亚急性衰老模型的形成机理是在一定时间内给动物连续注射D半乳糖，使细胞内半乳糖浓度增高，其在醛糖还原酶的催化下还原成半乳糖醇，这种物质不能进一步代谢而堆积在细胞内，从而影响细胞正常渗透压，使细胞肿胀，膜结构和生理功能紊乱，最终导致衰老的发生。此模

8、型是当前抗衰老研究的较好模型，因此，本实验亦选用此方法制作了衰老大鼠肝细胞模型。线粒体是细胞的能量代谢中心。已有许多研究报道，衰老时线粒体发生肿胀、变性、数量减少等一系列退行性改变，因此，线粒体被认为在细胞衰老过程中具有重要的作用［2］。琥珀酸脱氢酶（SDH）是在柠檬酸循环中，催化琥珀酸与延胡索酸之间反应的一种酶。它存在于所有有氧呼吸细胞的线粒体内膜，是线粒体内膜的标志酶。SDH活性的变化与线粒体损伤同时出现，与线粒体的数目平行升降。因此，SDH可代表线