儿童三种肺炎支原体检测法的临床应用分析

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1、儿童三种肺炎支原体检测法的临床应用分析蒋玉莲，黄彩芝，赖源，李先斌【摘要】目的探讨肺炎支原体（MP）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应（PCR）法和血清MP被动凝集法（MP-Ab）等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性。方法采用3种MP检测法对362例临床拟诊为呼吸道（非细菌性）感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，每个患儿取咽拭子做快速培养和PCR，同时取血清做MP-Ab检测，对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。结果回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例，阳性率为

2、51.3%，病程为（4.5±2.6）天；PCR法检测出阳性103例，阳性率为67.8%，病程为（6.2±3.5）天；MP-Ab法检测出阳性127例，阳性率83.5%，病程（8.1±4.5）天。结论3种MP检测法的敏感性与病程有相关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。【关键词】肺炎支原体；快速培养法；咽拭子聚合酶链反应；血清抗体；配对研究肺炎支原体（mycoplasmapneumoniae,MP）是婴幼儿、青少年急性呼吸道感染的主要病原体之一，临床上大多数表现为呼吸道感染综合征，其中约3%～10%

3、可发展为支原体肺炎。但只根据临床症状很难鉴别由MP或病毒、细菌等病原体引起的儿童呼吸道感染，给临床治疗带来一定的困难。笔者采用3种MP检测法对362例临床拟诊为呼吸道（非细菌性）感染患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，通过病例回顾来探索对支原体肺炎敏感的实验室诊断方法，以协助临床准确做出诊治。1材料与方法1.1对象收集湖南省儿童医院检验科2006年1月1日～9月30日在呼吸免疫科就诊住院患儿，有呼吸道感染症状，已经初诊为非细菌性感染的患儿362例作为研究对象，其中男175例，女187例；年龄为2个月～12岁，病程为1～90天

4、。1.2方法具体方法有：（1）用MP快速培养法、PCR法和MP-Ab法等3种MP检测法对362例研究对象同时进行检测，记录结果。（2）通过研究对象病历回顾统计MP感染的例数，并按年龄、病程和3种MP检测法结果进行统计学分析。1.3临床诊断MP感染的诊断标准按文献［1］、临床症状、体征标准，包括回顾性诊断——即患儿经红霉素治疗有效，经青霉素、头孢菌素治疗无效者等；以及实验室检查3种检测法至少有一种阳性。病程计算方法：以病历本记录为准，即在患儿开始有症状或体征时开始计算，到患儿来就诊检测时为止进行计算。1.4MP快速培养法支原体

5、分离鉴别培养液由珠海市浪峰生物技术有限公司提供。清晨患儿未洗漱前用咽拭子取咽部分泌物，严格按说明书进行，将咽拭子用无菌生理盐水处理，接种到预温的培养基中，37℃培养；培养基液体颜色由紫红色变为草绿色或嫩绿色且清亮，并且在静置时，瓶底有蓝色颗粒或物质沉淀为阳性，5天后培养基颜色不变或无蓝色颗粒或物质沉淀为阴性。PCR法：试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。应用PCR法检测MP-DNA，严格按试剂盒说明书进行，以在紫外灯下出现180bp扩增带结果判为阳性。每次试验均设阳性、阴性对照（阳性对照为MP质粒，阴性对照为无菌生理盐水

6、），由专人进行操作，质量控制。MP-Ab法：试剂为日本瑞必欧株式会社MP-Ab检测试剂SERODIA-MYCOⅡ凝集试验试剂盒，严格按试剂盒说明书操作，抽取患儿静脉血3ml，采用明胶颗粒被动凝集法，用血清检测，结果以≥1∶40判断为阳性。每次试验均设未致敏明胶颗粒、致敏明胶颗粒和阳性、阴性血清进行测定。1.5统计学方法计量资料用均数±标准差（x±s）表示，各年龄组与3种检测方法结果比较用Spearman检验；各年龄组间确诊病例的阳性率比较用χ2检验；3种检测方法阳性结果与病程之间的比较用q检验。2结果2.1阳性样本经过回顾性

7、诊断，在配对研究组362例研究对象中有152例符合MP感染的诊断标准，即有152例确诊病例，其中肺炎45例，支气管炎56例，上呼吸感染49例，支气管哮喘2例。MP快速培养法检测出78例阳性，PCR法检测出103例阳性，MP-Ab法检测出127例阳性。2.2结果分析各确诊病例的年龄分布，见表1。表1显示儿童MP感染的年龄以3～4岁年龄段的病例最多，为46例，阳性率最高，为70.77%，与其余年龄组段比较P<0.05。3种检测法的阳性检测结果与年龄分布见表1，表1显示3种检测法与年龄之间差异无统计学意义，以3～4岁的年龄段

8、与其余年龄组段比较差异无统计学意义，P>0.05。不同病程患儿3种检测法的检测结果，见表2，表2显示MP快速培养法为阳性的患儿病程均值较短为（4.5±2.6）天，PCR法为阳性的患儿病程均值为（6.2±3.5）天，MP-Ab法为阳性的患儿病程均值较长为（8.1±4.5）天。3组之间两