小鼠移植瘤模型动态观察

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1、小鼠移植瘤模型动态观察摘要：利用小鼠移植瘤模型动态观察血管生成拟态的时空变化。方法：采用B16黑色素瘤细胞和C57小鼠制作小鼠恶性黑色素移植瘤动物模型，成瘤后根据随机数字表每天随机抽取一只小鼠处死，共12d，获得肿瘤样本114例。常规HE染色和CD31、PAS染色。显微镜下分别计数肿瘤组织中央区和外周区的高倍视野（400）下血管生成拟态以及内皮依赖性血管。结果：在移植瘤形成的第1～8天，肿瘤组织内存在血管生成拟态。第9～12天该结构被内皮依赖性血管替代。肿瘤中央区、外周区血管生成拟态密度均呈现先递增后递减趋势；两个区域内的血管生成拟态密度比较：在第1～6天内肿瘤中

2、央区高于外周区，在第7～8天肿瘤外周区高于中央区。内皮依赖性血管在肿瘤组织的中央区和外周区呈现递减趋势。两个区域内的内皮依赖性血管密度比较：在第1～7天肿瘤中央区内皮依赖性血管密度高于外周区，在第8～12d两个区域内的内皮依赖性血管密度无明显差别。血管生成拟态密度与肿瘤组织的坏死率之间呈密切负相关（r=-0.978,P<0.05）；内皮依赖性血管密度与肿瘤组织坏死率之间亦存在负相关（r=-0.230,P<0.05）。结论：黑色素瘤移植瘤中血管生成拟态是肿瘤细胞为适应环境而产生的一种暂时性的血液供应方式，与内皮依赖性血管并存于肿瘤组织内。随肿瘤生长变化而

3、与内皮依赖性血管之间存在一定的时空变化规律。【关键词】血管生成拟态；肿瘤血管生成；恶性黑色素瘤血管生成拟态是一种与传统的肿瘤血管生成途径完全不同的、不依赖内皮细胞的全新的肿瘤细胞的血液供应方式。1999年由美国lol。75%酒精消毒小鼠鼠蹊部，每只小鼠鼠蹊部皮下注射0.2ml细胞悬液。每天观察动物生命体征及肿瘤细胞生长状况，10d后接种部位开始出现皮下肿块。根据随机数字表每天抽取一只小鼠处死，共持续12d。解剖并仔细检查动物全身，共获得肿瘤样本114例。全部标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋。1.3计算机图象处理一抗CD31、HMB45为鼠抗小鼠单克隆抗体，

4、即用型，6ml包装，SNATACRUZ生产，进口分装；CathepsinD、MMP2、MMP9兔抗多克隆抗体，使用空军总医院医学工程研究所的BINDAFIMG图象采集处理系统（91年版）计算每张切片中坏死面积。1.4计数方法1.4.1区域划分中央区与外周区的划分：避开肿瘤坏死,将每张切片中肿瘤组织镜下视野均匀分成三等份，即内1/3、中1/3、外1/3三个区域，内1/3区域即为中央区，外1/3即为外周区。血管生成拟态周围与远离血管生成拟态、内皮依赖性血管周围与远离内皮依赖性血管的划分：以血管生成拟态、内皮依赖性血管为中心的高倍视野定义为血管生成拟态、内皮依赖性血管周

5、围；距离上述视野一个高倍视野的肿瘤细胞即为远离血管生成拟态和内皮依赖性血管。血管生成拟态判断标准：无内皮细胞衬复的PAS阳性管道、衬复PAS阳性物质的肿瘤细胞围成不规则管腔，且管腔内存在红细胞，周围没有出血坏死和炎症细胞浸润。(责任编辑：admin)1.4.2计数方法低倍镜下找到血管生成拟态和内皮依赖性血管存在的典型区域，换成高倍镜（400），连续计数10个高倍视野内的血管生成拟态、内皮依赖性血管，取其均值即为血管生成拟态密度、内皮依赖性血管密度。同时计数血管生成拟态周围、内皮依赖性血管周围、远离血管生成拟态、远离内皮依赖性血管的肿瘤细胞中各种指标阳性细胞数（各项

6、指标均连续计数10个高倍视野，每个视野内随机计数100个肿瘤细胞中的阳性细胞数，取其均值）。1.5统计学处理应用SPSS10.0统计软件包对该实验资料进行数据处理，以P<0.05具有统计学意义。2结果2.1肿瘤组织内的血管生成拟态的形态学特点通过CD31和PAS双重染色，在该移植瘤的第1～8天可见到肿瘤间质中樱桃红色的PAS阳性血管样图案，在第9～12天该结构逐渐被内皮依赖性血管所替代。PAS阳性血管样图案呈现多种形状（直的、平行的、交叉的、环状的、有分支的和网状的），PAS管状结构的管壁厚薄不一，有的PAS管状结构中可以见到单行排列的红细胞。同时可见到典型

7、的血管生成拟态样结构：外层为CD31染色阴性的肿瘤细胞，内衬樱桃红色的PAS阳性物质，管腔内有成堆的红细胞，证实恶性黑色素移植瘤中也存在血管生成拟态结构，并且具有肿瘤血液供应功能。实验中还发现有的血管生成拟态中肿瘤细胞围成的不规则管腔内无PAS阳性物质衬复，同时管腔内存在红细胞。2.2血管生成拟态和内皮依赖性血管在黑色素瘤不同移植时间和不同区域变化本实验小鼠移植肿瘤组织内的血管生成拟态出现在移植瘤形成后的第1～8天，并与内皮依赖性血管共同存在。随着移植肿瘤的发展，血管生成拟态在肿瘤的不同区域呈现不同的变化趋势。肿瘤中央区的血管生成拟态密度在移植瘤形成后的第1～3天

8、呈现递增趋