铁皮石斛茎节离体培养的研究论文

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1、铁皮石斛茎节离体培养的研究论文【摘要】目的通过无菌茎段实现铁皮石斛快速繁殖。方法将铁皮石斛试管苗茎节接种于不同NAA浓度的MS培养基上诱导腋芽萌发，并在含不同激素配比和有机添加物的培养基上继代和诱导生根。结果NAA0.4mg/L，6-BA5mg/L时铁皮石斛腋芽萌发率达93.33%；NAA0.3mg/L，6-BA2mg/L时丛苗的生根率达96.67%，香蕉汁和土豆汁能够显著促进丛生芽的增殖和壮苗生根。结论建立了适合铁皮石斛茎段离体培养的快速繁殖体系。【关键词】铁皮石斛无菌茎节离体培养激素浓度有机添加物Abstract:ObjectiveTodeveloparapid

2、propagationofDendrobiumcandidumusingtheasepticnodalsegmentsofshoots.MethodsAxenicnodalsegmentsinatedonMurashigeandSkoog(MS)basalmediumsupplementedediumcontainingdifferentconcentrationhormonesandorganicsusbstance.Results93.33%oftheaxenicnodalsegmentsofDendrobiumcandidumgerminatedontheme

3、diumg/L,.freelg/Land96.67%ofexplantrootedonthemediumcontainingNAA0.3mg/L,6-BA2mg/L.Thegrootedbytheextractofbananaandpotato.ConclusionTheinvitropropagationofDendrobiumcandidumfromaxenicnodalsegmenthasbeenestablished.Keycandidum；Axenicnodalsegments；Invitropropagation；Concentrationofhormo

4、ne；Organicsusbstance石斛最早见于《山海经》，药用始载于《神农本草经》，其后，历代诸家本草均予录述。在《本草纲目》中被列为上品。至今石斛仍是中医常用的滋阴清肺、生津止渴、养胃除烦之要药.freelcandidum是现行版《中国药典》收载的5种常用石斛之一，是石斛类药材的上品。铁皮石斛又名黑节草、铁皮吊兰、铁皮兰，属兰科石斛属附生植物。加工后的铁皮石斛又被称为铁皮枫斗，市场价格昂贵，是一种经济价值和医用价值都很高的名贵中药。然而由于近年来过度采伐、生态环境破坏等原因，铁皮石斛野生资源日渐匮竭，而其对生境要求苛刻、自然繁殖率低等因素进一步将铁皮石斛推向

5、灭绝的边缘，现在已被列为濒危保护的中药品种［10］。利用铁皮石斛体外快繁是解决目前铁皮石斛资源与需求矛盾的重要途径。目前关于铁皮石斛的研究主要集中在原球茎增殖、分化等方面［11,12］，以茎节为材料，实现铁皮石斛体外快繁的研究尚鲜见报道。本研究拟通过无菌茎段的离体培养，建立适合铁皮石斛的快速繁殖体系。1材料与方法1.1材料选择与处理以本实验室培养保存的生长旺盛、茎节粗壮的铁皮石斛试管苗为材料，切成长度为1～1.5cm带1～2个腋芽的小茎段。1.2腋芽萌发将无菌茎段接种于添加30g·L-1蔗糖、8.0g·L-1琼脂、pH为5.6的MS培养基上。其中6-BA5mg·L-

6、1，并加入不同浓度的NAA（0～0.8mg·L-1）。培养温度为25℃，光照强度为2000lux，光照时间为12h·d-1。定期观察不同浓度生长素对铁皮石斛腋芽萌发的作用。1.3丛生芽增殖将已萌发的腋芽接种于MS+30g·L-1蔗糖+NAA0.4mg·L-1+6-BA5mg·L-1，并添加200g·L-1的香蕉、土豆、西瓜、豆芽的增殖培养基上，并以不加天然添加物的培养基为对照，pH均为5.6，考察不同提取物对丛生芽增殖的影响。培养条件同上。1.4壮苗生根将生长健壮，株高为2cm左右的丛生苗接种于MS+30g·L-1蔗糖+8.0g·L-1琼脂，激素浓度分别为NAA0.

7、1，0.3，0.5mg·L-1和6-BA2，4mg·L-1或MS+30g·L-1蔗糖+NAA0.3mg·L-1+6-BA2mg·L-1+8.0g·L-1琼脂，添加200g·L-1不同提取物的生根培养基上，进行诱导生根和壮苗试验。培养条件同上。1.5统计试管苗生长状况试管苗接种培养50d后，分别观察统计芽诱导率、芽增殖数、株高、根诱导率、生根数、根长、植株健壮度及褐化程度。2结果2.1不同生长素浓度对茎段腋芽的诱导作用在6-BA为5mg·L-1时，不同浓度的NAA诱导茎段腋芽萌发的结果如表1所示。由表1可知NAA对铁皮石斛茎段腋芽萌发的作用与其浓度有关。当加入浓度