广西鸭甲型肝炎病毒的分离鉴定及dhav-1卵黄抗体elisa检测方法的建立

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1、90．4％．98．3％，氨基酸的同源性为91．3％．98．3％。本次分离毒株与台湾新型即DHAV．2的氨基酸同源性均低于20％。本研究针对目前广西主要流行DHAV．1，运用差速、超速离心法制备DHAV．1抗原，作为包被抗原，利用盐析法抽提纯化卵黄抗体，建立检测DHAV．1卵黄抗体的间接ELISA方法。通过ELISA反应条件的优化，得出最佳抗原包被浓度是6．7899／mL，最佳酶标抗体(兔抗鸭IgG／HRP)T作浓度确定为0．3199／mL，最佳样品抗体浓度确定为10．37．g／mL、敏感测定值为0．08,g／mL，OD45of隘界值为0．233，建立了检测血清1型D地W卵黄抗体的间接ELI

2、SA检测方法。该方法的特异性及重复性良好。用建立的方法对40份临床卵黄样品的检测，阳性检出率为80％。证明检测方法适用于血清1型DHAV卵黄抗体的检测，且操作简单、结果直观，适用于基层生产单位。本次研究共分离到7株DHAV毒株，包括5株DHAV-1毒株，2株DHAV-3毒株，并对它们的主要结构蛋白基因VPl进行遗传进化分析，结果显示均与DHAV．2毒株同源性低。并成功建立了DHAV．1卵黄抗体ELISA检测方法检测方法。研究成果将为今后广西DHAV流行病学研究以及种鸭DHAV．1免疫水平监测和疾病防控提供有用材料及技术支持。关键词：鸭甲型肝炎病毒分离鉴定VPl基因序列分析卵黄抗体间接ELI

3、SA万方数据ISOLATIONANDIDE]NTIFICATl0NOFDUCKHEPATITISAⅥRUSANDTHEDEVELOPⅣ【ENT0FANELISAFORDETECTNGEGGYOLKANTIBODIESAGAINSTDHA弘1ABSTRACTInrecentyears，duckhepatitisvirus(DHV)isstillallepidemicdiseaseinmanyprovincesincludingGuangxiinchina．DuckhepatitisAvirus(DHAV)isthecausativeagentofduckviralhepatitisandha

4、sthreedifferentserotypes．Therefore，itisnecessarytoisolateandidentifytheduckhepatitisviruscirculatinginGuangxiinresentyearsandestablishanindirectELISAmethodfordetectingtheantibody’Slevelofthevaccinedbreedingduckstoprovideusefulmaterialandtechniqueforstudyoftheetiologyanddetectionofantibodyinthefutu

5、re．Itisofgreatsignificanceforepidemiologicalstudies，preventionandcontr01ofthedisease．Inthisstudy,twelveclinicalsampleswerecollectedfromsuspectedforDVHandtheywereprocessedandusedtoisolateandidentifytheDHAVwiththeconventionaltechnique．Thentheisolatesweretypedbytheserologicalneutralizationtestandadup

6、lexreal-timeRT-PCRassayfortheidentificationofDHAV．1andDHAV．3．TheresultsshowedthatsevenisolateswererecoveredfromtheclinicalsamplesandnamedasGXNN01，GXNN02，GXGL01，GXLZ01，GXLZ02，GXNN03，andGXGL02，respectively．Thevirusisolationratewas58．33％．TheIsolatesGXNN01，GXNN02，GXGL01，llI万方数据GXLZ01，GXLZ02werecluster

7、edintheDHAV-1serotypeandGXNN03，GXGL02wereclusteredintheDHAV-3．TheresultsofserotypingareconsistentedwiththatofduplexRT-PCR．SequencingandanalysisofthenucleotidesequencesofthemainstructureproteinVP1werealsodonewithc