猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及elisa检测方法的初步建立

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1、密级：论文编号：中国农他科学院学位论文'猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及ELISA检测方法的初步建立IsolationofPorcineEpidemicDiarrheaVirusandEstablishmentofELISAMethodsforAntibodyDetection硕士研究生：潘溪指导教师：童光志研究员申请学位类别.•农学硕士专业.•预防兽医学研究方向：分培养单位：上海兽医研究所研究生院2015年5月独创性声明本人卢明所M交的论文足我个人在导师指导下进行的研究:丨:作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过

2、的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教冇机构彻学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：潘时间：年〔;以’

3、丨关于论文使用授权的声明本人2全r解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，屮w农业科学院丨i权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采川影印、缩印或扫描等M制T.段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以川"式在小

4、Hj媒体上发衣、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间:年[丨丨中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目猪流行性腹泻病

5、毒的分离鉴定与ELISA检测方法的初步建立兽医微生物论文作者潘溪专业预防兽医学研究方向及其分指导教师童光志培养单位（研究所、中心）上海/医研究所1,y：姓名职称单位专业f::签名刘金华教授中国农业大学预防兽医学评阅苑纯秀副研究员上海兽医研究所预防兽医学/人答辩周继勇教授浙江大学微生物学主席秦爱建教授扬州大学预防兽医学丁铲研究员上海兽医研究所预防兽医学答马志永研究员上海兽医研究所预防兽医学f<辩李国新研究员上海兽医研究所预防兽医学委贝会议记录（秘书）顾惠明论文答辩时间地点2015年5月25日，上海兽医研究所。密级:论文编号:中国农业科学院学位论文猪流行性腹泻病毒的分离鉴定

6、与ELISA检测方法的初步建立IsolationofPorcineEpidemicDiarrheaVirusandEstablishmentofELISAMethodsforAntibodyDetection硕士研究生：潘溪指导教师：童光志研究员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物及其分子生物学培养单位：上海兽医研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationIsolationofPorcineEpidemicDiarrheaVirusandEstabl

7、ishmentofELISAMethodsforAntibodyDetectionM.S.Candidate:XiPanSupervisor:Prof.GuangzhiTongMajor:PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty:VeterinaryMicrobiologyandMolecularBiologyMay2015摘要猪流行性腹泻（Porcineepidemicdiarrhea，PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcineepidemicdiarrheaviruse，PEDV）引起的一种急性肠道疾病，以呕吐、水样腹泻为主要特征，

8、严重时可引起病猪死亡。1978年，该病首次在英国和比利时被报道，此后欧洲、亚洲的多个国家相继报道了PED的发生与流行。近几年，一种变异的PEDV在我国猪群中开始流行，并引起七日龄以内新生仔猪严重腹泻和高死亡率，本研究从腹泻仔猪的肠道组织成功分离到一株PEDV流行毒株，测定了其全基因组序列，并初步建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法和基于单克隆抗体的竞争性ELISA方法。具体研究内容如下：1、PEDV的分离鉴定与全基因组分析本试验通过尝试多种细胞、培养系统和培养条件，成功分离出一株猪流行性腹泻病毒。通过间接免疫荧光试验（IFA）、全基因组克隆、同源性比较和系统进化树分

9、析等证实该分离株是目前广泛流行的变异PEDV，暂时命名为SH6株，属于GroupII。全序列分析证明该病毒的基因组大小为28,038bp，从5’端至3’端，编码蛋白依次是多聚蛋白（6,781aa），S蛋白（1,386aa），ORF3蛋白（224aa），E蛋白（76aa），M蛋白（226aa）和N蛋白（441aa）。2、PEDVN蛋白的原核表达和间接ELISA检测方法的初步建立为建立猪流行性腹泻病毒N蛋白间接ELISA检测方法，本研究从新分离PEDV流行毒株（JS-2013）中扩增其N基因，并将N基因克隆至pCold-IDNA原