钙调磷酸酶调节蛋白1rcan1与nfκb相互作用机制及其影响白血病细胞活力的研究

《钙调磷酸酶调节蛋白1rcan1与nfκb相互作用机制及其影响白血病细胞活力的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、.飞.原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：鲤邀数日期：If_!!，_迦关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、

2、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：苤阻邀导师签名：。丕鱼焦』笙日期：丝¨二兰兰!山东大学硕士学位论文目录目录iTABLEOFCONTENTS．iv中文摘要．诚Abstract．ix符号说明．．】【i第一章前言11．1．核转录因子NF．1cB．11．1．1．核转录因子NF．r,B的组成和功能．11．1．2．核转录因子NF．KB的激活．11．1．3．核转录因子NF．r,B的调节．．31．1．4．NF．r,B的生物功能作用41．1．4．1．NF．KB与细胞凋亡。41．1．4．2．NF．r,B和免疫应答作用

3、51．1．4．3．NF．r,B和肿瘤．51．2．RCANl基因．61．2．1．RCANI的发现。61．2．2．RCANl的基因家族71．2．3．RCANI在细胞内的功能71．2．3．1．RCANl对Calcinemin的双重调节作用71．2．3．2．RCANl与SODl的调控．91．2．3．3．RCANI与NF．r,B信号通路．91．2．4．RCANl与疾病一91．2．4．1．RCANl与氧化应激．91．2．4．2．RCANl与神经元凋亡101．2．4．3．RCANl与心肌肥大101．2．4．4．RCANl与血管发生101．2．4．5．RCANl和DS．

4、1l1．2．4．6．RCANl与AD．11i山东大学硕士学位论文1．2．4．7．RCANl与肿瘤12第二章材料与方法132．1．质粒的构建132．1．1．RCANl启动子质粒的构建．132．1．2．RCANl-NF．KB质粒的构建142．1．3．定点突变RCANl启动子质粒的构建152．1．4．病毒质粒构建．152．2．细胞培养。162．2．1．细胞培养基的制备162．2．2．细胞的消化．162．3．细胞转染162．4．双荧光素酶活性检测172．5．反转录PCR(ReverseTranscription．PolymeraseChainReaction，R

5、T-PCR)一182．5．1．细胞的制备．182．5．2．RNA的提取l82．5．3．cDNA的合成．182．5．4．半定量．PCR(Semi．Quantifieation-PCR)一192．5．5．实时定量．PCR(RealtimeQuantification．PCR)192．6．WesternBlotting192．7．免疫共沉淀(CO．口)202．8．腺病毒的包装和感染212．9．细胞活力检测212．10．细胞凋亡的检测2l2．11．核蛋白的提取和EMSA实验2l2．11．1．核蛋白的提取．．2l2．11．2．EMSA实验222．12．原代细胞的分

6、离23第三章实验结果243．1．RCANl抑制NFrB的活性243．1．1．RCANl抑制NF．KB的荧光素酶活性24ii山东大学硕士学位论文3．1．2．RCANI抑制NF．KB入核．．253．1．3．RCANl抑制NF．r,B结合活性。263．2．RCANl能增加Ir,Ba的稳定性并与其具有蛋白间的相互作用273．2．1．RCANl的增加了Ir,Ba的稳定性273．2．2．RCANl的敲除促进IKBa第42位的络氨酸残基磷酸化。273．2．3．RCANl与Ir,．Ba具有相互作用293．3．RCANl的诱导了急性白血病细胞系和原代急性白血病细胞的凋亡．

7、293．3．1．RCANl抑制了急性白血病细胞系中NF．1cB的活性．293．3．2．RCANl降低了急性白血病细胞系的活力．．303．3．3．RCANl降低了急性白血病细胞系的活力一3l3．3．4．RCANl诱导了急性白血病细胞系Caspase活性333．4．NF．媚对RCANl的调节333．4．1．NF．1cB能特异性上调RCANI．4，而不能上调RCANl．1的表达．333．4．2．NF．'①能上调RCANl．4启动子活性．．343．4．3．RCANI．4启动子上NF．r,B效应元件的识别36第四章讨论与总结．39参考文献．42致谢．．48硕士期间

8、发表的学术论文。49学位论文评阅及答辩情况．50外文论文5l山东大学硕士学位论文