细胞生物学实验讲义

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1、北方民族大学生物科学与工程学院《细胞生物学》实验讲义细胞生物学实验一细胞分裂相的观察（综合性，3学时，生技、生工专业必修）一、实验目的1.掌握减数分裂标本的制备方法；2.掌握生殖细胞减数分裂发生过程及各个时期的染色体和细胞变化特点；3.了解植物生殖细胞的形成过程。二、实验原理减数分裂是生殖细胞发生的一种特殊细胞分裂方式，特点是染色体复制一次，细胞分裂两次，形成4个子细胞，每个子细胞染色体数目减半。经过受精作用后，染色体数目恢复，这样在物种延续过程中保证了遗传的相对稳定性和基因的多样性。三、实验仪器、材料和试剂1.仪器、用具

2、：眼科镊子、解剖针、刀片、吸水纸、显微镜、载玻片、盖玻片；2.材料：普通小麦(Triticumaestivum，2n=2x=42)或黑麦（Secalecereale，2n=2x=14）、大麦(Hordeumsativum，2n=2x=14)的幼穗（旗叶叶枕与幼穗顶部距离3～5cm，穗长约6～8cm）；或大葱（Alliumfistolosum，2n=2x=16）花序（外包绿色总苞者，长2～3cm）；或玉米(Zeamays，2n=2x=20)幼穗（雄穗）。3.试剂：苯酚品红、醋酸洋红。注：以下染色剂的配制①1％醋酸洋红（ace

3、tocarmine）：酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。配方：洋红1g；45％醋酸100ml。煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀），放入棕色瓶中备用。②改良苯芬品红染色液（Carbolfuchsine）核染色剂。配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。原液A：3g碱性品红溶于100ml70％酒精中。原液B：取原A液10ml加入到90ml5％石炭酸水溶液中。原液C：取原B液55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马

4、林（38％的甲醛）。（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1～1.8g，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著（若立即用，则着色能力差）。适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用，假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。-31-北方民族大学生物科学与工程学院《细胞生物学》实验讲义四、实验方法与步骤1.取材：当麦类作物（小麦、大麦、黑麦等）处于孕穗

5、后期时，选取旗叶叶枕距幼穗顶部约3～5cm的幼穗，取材时间在上午9～11时为好。2.固定：新鲜幼穗可直接观察，也可剥去外部叶鞘，剪下幼穗，投入Carnoy固定液中固定4～24h后，倒掉固定液，用95%、85%酒精换洗2次，每次1h，然后转入70%酒精中保存备用。3.涂片与染色：取出一段幼穗，置于盛有蒸馏水的培养皿中，剥下一个小穗，取其中一朵小花，夹取其中一个花药置于清洁的载玻片上，用刀片切去花药的两端，加一滴苯酚品红染液（或1％醋酸洋红），边染色边用镊子、解剖针用力涂抹挤压花药，挤出花粉母细胞，去掉花药等杂物，盖上盖玻片，

6、用吸水纸吸取四周多余染液，即可观察。如果染色过深，可加上一滴70%酒精分色，然后用吸水纸吸去多余染液再观察。4.减数分裂时相的观察：先在低倍镜找到细胞，然后用高倍镜观察分裂相，绘图。5.对于好的压片，可永久制片保留：5.1揭片：将玻片置于-20℃冰箱冷冻30min结冰，或放入液氮处理45～60s，用镊子或解剖刀直接揭开盖片，将有材料面朝上，37℃干燥，晾干载片及对应的盖片。5.2脱水与透明：用由低浓度到高浓度（70％～80％～90％～100％）的梯度酒精冲洗1～2min，或在染缸中脱水2～5min，晾干。注意：整个脱水透明

7、过程中，必须保持载玻片和盖玻片原来相对的方向和位置，同时注意操作轻巧，以免造成玻片上材料漂失。5.3封片：在中性树胶中加入1/5～1/4的二甲苯进行稀释，滴一小滴稀释胶在脱水透明后的载玻片中央，将盖玻片盖回原来位置封片。-31-北方民族大学生物科学与工程学院《细胞生物学》实验讲义注意：覆盖盖玻片时，按原定位位置水平盖下，使之随着树胶的扩展自然下沉，切不可施加压力或移动盖玻片。如发现封片中树胶有气泡，应让其自然逸出或用针尖烧热后烫一下，使气泡逸出。如树胶滴得过多而逸出盖玻片四周，待树胶凝固后，用脱脂棉蘸二甲苯轻轻擦净逸出的树

8、胶。封片后平放晾干，镜检，物象清晰符合要求的保存，并贴上标签，注明标本名称、作者姓名和制片日期。五、实验结果小麦“宁春42号”PMC中期Ⅰ染色体配对六、作业1.绘出你观察的细胞减数分裂相图。注意：构图和布局、勾画轮廓、点点映衬、标注（右侧，引线平直，下方写图题，加括号表面放大倍数）。2.简述减数分裂各时