细胞生物学实验讲义(新)

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1、细胞生物学实验讲义吴锦程梁杰编莆田学院环境与生命科学系生物技术专业2009年2月44目录1.前言.........................................................................................32.实验一普通光学显微镜及暗视野显微镜的使用......43.实验二荧光和相差显微镜及其使用...............164.实验三细胞膜的渗透性...................................................235.实验四细胞凝集反应.....

2、..................................................276.实验五叶绿体的分离与荧光观察...................................297.实验六线粒体与液泡的超活染色与观察.......................328.实验七酸性磷酸酶的显示方法(选做）........................369.实验八植物细胞原生质流动及其影响因素(选做）....3910.实验九植物细胞骨架的观察(选做）............................4144前言细胞生物学

3、是当前生命科学中核心学科之一，也是重要的专业基础课，其理论与实验技术已广泛地用于研究细胞的形态结构、基因表达与克隆、病毒、细菌、胚胎发育、远缘杂交、人类疾病的发病机制、药物机理等领域，随着分子生物学的研究渗入，分子细胞生物学也得到了突飞猛进的发展。目前许多综合大学、农业、医学及药科大学把细胞生物学作为本科生和研究生的必修课或基础理论课，同时也开设了专门的细胞生物学实验课，学生们通过实验，进一步地加深了对理论课的理解，也为今后的专业实验课和毕业论文实验奠定了基础。本讲义精心选择了细胞生物学中的常规实验，作为教材面向本系生物技术专业本科生进行讲授。44实验一普通

4、光学显微镜及暗视野显微镜的使用一、实验目的1.强化普通光镜结构和使用技能的知识，掌握让其发挥最佳效能的方法。2.了解暗场显微镜的构造和原理，并掌握它们使用方法。二、实验用品1.材料与标本：载玻片、盖玻片、牙签，香柏油、生物永久装片、擦镜纸、洋葱。2.器材：普通光学显微镜，暗视场显微镜。三、实验内容和方法（一）普通光学显微镜1.显微镜的用途显微镜是用来观察、记录和研究经过制片技术处理后被检物体细微结构的最主要的光学精密仪器。400多年来，经不断改进，显微镜的结构和性能逐步完善，形成了品种繁多、型号各异的光学显微镜系列它广泛地应用于各学科领域中，对微观世界的探索

5、及理论的研究起着极其重要的作用（如图1-1）。最常用的是普通光学显微镜，此外还有多种专用于不同显微术的显微镜，它们是利用不同的光学原理在显微镜基本设计的基础上发展而来的，如相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜和倒置显微镜等具有特殊功能或用途的光镜。形形色色的光学显微镜虽然外形和结构差异较大，但其基本构造和工作原理是相似的。44图1-1光学显微镜型号实例2.显微镜的一些基本知识普通光学显微镜的基本工作原理是利用物镜和目镜的多组凸透镜将物像逐级放大并反射到视网膜上的过程。而显微镜的性能和质量的高低可通过分辨率、数值孔径、总放大倍率等指标来反映。(1)分辨率：衡量

6、光学系统分辨相隔微小距离的两个点能力的指标，即“能够分辨两点之间最小距离的能力”，称之为光学系统的分辨率。一个光学系统它所能分辨的两点之间的距离愈小，分辨率也就越高。显微镜的分辨率用公式表示为：d=0.61λ/NA式中d为最小分辨距离；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径。可见物镜的分辨率是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定。NA值越大，照明光线波长越短，则d值越小，分辨率就越高。要提高分辨率，即减小d值，可采取以下措施:①降低波长λ值,使用短波长光源。②提高NA值。③消色差。④增加明暗反差。(2)数值孔径：数值孔径简写NA，数值孔径是物镜和聚光镜的

7、主要技术参44数，是判断两者（尤其对物镜而言）性能高低的重要标志。其数值的大小，分别标科在物镜和聚光镜的外壳上。这里必须指出，为了充分发挥物镜数值孔径的作用，在观察时，聚光镜的NA值应等于或略大于物镜的NA值，数值孔径与其它技术参数有着密切的关系，它几乎决定和影响着其它各项技术参数。它与分辨率成正比，与放大率成正比，与焦深成反比，NA值增大，视场宽度与工作距离都会相应地变小。(3)放大率：放大率就是放大倍数，是指被检验物体经物镜放大再经目镜放大后，人眼所看到的最终图像的大小对原物体大小的比值，是物镜和目镜放大倍数的乘积，即：显微镜的总放大倍率=单个物镜的放大

8、倍率×目镜的放大倍率。放大率也是显微镜的重要参数，但