正交试验优选蜗牛多糖提取工艺的研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果正交试验优选蜗牛多糖提取工艺的研究作者：湛孝东王克霞李朝品【摘要】目的：探讨蜗牛多糖的最佳提取工艺。方法：运用正交试验对浸体时间、温度、料液比和乙醇浓度4个因素进行优选。结果：蜗牛多糖提取条件的最优组合为：浸提时间6h、浸提温度70℃、料液比1︰30和乙醇浓度90%。结论：优选的蜗牛多糖提取工艺稳定可行，能有效提高蜗牛多糖得率。【关键词】正交试验蜗牛多糖提取优选多糖是广

2、泛存在于有机体内的一种重要信息分子的受体，它参与分子识别、细胞黏附以及机体防御等过程的调节，使多糖具有抗病毒、抗肿瘤、免疫增强、降血糖、抗凝血和抗衰老等多种生物学活性。此外，多糖大多提取于动植物，是一类毒副作用小的天然药物，因此受到广泛关注。我们发现蜗牛多糖具有抗病毒和增强免疫等活性[1～2]。但目前的蜗牛多糖提取工艺存在得率较低的缺点，我们采用正交试验的方法对现有工艺进行了优化，结果报道如下。1材料与方法试剂和议器试剂：无水乙醇、氯仿、正丁醇、苯酚、葡萄糖等，以上试剂均为分析纯。仪器：恒温磁力搅拌器

3、，国华电器；电子天平，瑞士Metller；真空干燥箱，上海一恒；UV1600紫外-可见分光光度计，日本岛津。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果实验方法正交试验设计参照预实验及文献资料，选取浸体时间、温度、料液比和乙醇浓度4个因素，每个因素3个水平，采用L9正交表，见表1。表1因素水平表多糖提取

4、新鲜活体条华蜗牛，去壳，清水洗净干燥后精确称取200g，按正交试验设计的因素水平，参考文献方法[3]，提取蜗牛多糖。标准曲线绘制及多糖含量测定采用苯酚-硫酸比色法，操作步骤如下；精密称取105℃下干燥至恒重的葡萄糖60mg，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，即为葡萄糖标准液。精密吸取上述溶液、、、、和，分别置于50ml容量瓶中，加蒸馏水定容。精密吸取上述溶液各，置试管中，然后各管加入5%苯酚1ml，摇匀后迅速加入浓硫酸7ml，5min后置40℃水浴中加热30min，取出置冰水浴5min。

5、以同样处理的蒸馏水作空白。490nm处测定吸光度A。以A值为纵坐标，以葡萄糖标准液浓度C为横坐标，绘制标准曲线。　根据蜗牛多糖吸光度及标准曲线回归方程计算出蜗牛多糖浓度，并计算得出其含量。结果.1正交试验结果不同浸体时间、温度、料液比和乙醇浓度正交试验结果见表2。.直观分析课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须

6、有创新性的成果从表2可以直观看出浸体时间、温度、料液比和乙醇浓度对蜗牛多糖得率都有影响，主次因素顺序为：A＞B＞D＞C。蜗牛多糖提取条件的最优组合为：A2B2D3C3，即浸提时间6h、浸提温度70℃、乙醇浓度90%和料液比1︰30。.方差分析结果见表3。表正交试验结果方差分析方差分析的结果表明，浸提时间和浸提温度对多糖的得率有显著性影响。.2标准曲线方程及多糖含量不同浓度的葡萄糖标准液对应的吸光度A值分别为、、、、和。计算出的葡萄糖标准曲线的回归方程为：A=－，r=。根据葡萄糖标准曲线的回归方程计算出

7、蜗牛多糖含量的平均值为%。.3验证试验精密称取蜗牛3份，每份200g，以上述蜗牛多糖最佳提取工艺进行提取。测得蜗牛多糖含量平均值为%，RSD=%，验证结果说明该工艺稳定可行。讨论　在正交设计优选提取条件中，我们得出的最佳乙醇浓度为90%，但是考虑到提取成本的因素，我们实际使用的乙醇终浓度为70%，然后通过反复多次沉淀。这既节约了成本又提高了多糖纯度，效果较理想。　现有文献报道的多糖提取方法课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从

8、本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果大多为植物多糖和菌类多糖，这类多糖的共同特点是成份单一，水溶性较好，因此提取过程较为简单。但蜗牛多糖大部分为蛋白多糖，因此分离较困难，这是蜗牛多糖得率不高的主要原因。此外动物多糖往往还含有脂类，脱脂是否完全直接影响多糖的纯度和得率。本研究参考其他贝类多糖的提取方法，采用甲醇温和脱脂的方法，避免了对多糖结构的破坏，取得了较好效