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《β-葡萄糖苷酶产生菌的分离鉴定及酶学性质分析开题报告》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、湖南科技学院本科毕业论文开题报告书论文题目卩■葡萄糖井酶产牛菌的分离鉴定及酶学性质分析作者姓名所属系、专业、年指导教师姓名、职称预计字数10,000开题FI期2012.12.18选题的根据：1)说明本选题的理论、实际意义卩•匍萄糖背陆(EC.3.2.1.21)乂称纤维二糖酚，可催化水解卩・D・衙萄糖芹键。它属于纤维素陆类，是纤维素分解酶系中的重耍组成成分，能够水解结合于末端非还原性的卩・D■葡萄糖键，同时释放出卩匍萄糊和相应的配基。其酶活的高低肓接彩响纤维素酶的总体酶活的高低。目前，国内外对木霉纤维素酶的研究较多，但由于普遍存在卩■匍萄糊廿酶活力很低的缺陷，致使纤维二糖积累，影响酶解效率。
2、有人在木霉纤维索酶小加入卩■葡萄糖井酶，能极人地提高纤维索酶的降解能力。在水果、蔬菜和茶叶的香气物质特别是讷烯醉类除了游离的挥发性气体外，还有人最以无香味非挥发性的前体・卩・糖甘的形式存在，卩胸萄糖背酶能将其水解为貝-有浓郁天然风味的香气物质，以改良在加工、贮藏过程中对风味的影响。另外,卩■葡萄糖昔酶的酶活高低是以茜草科植物梔子为原料生产天然色素・梔子蓝色素的技术关键。卩■葡萄糖昔臨在很多行业内广泛应用，具有巨大的商业价值。例如，作为饮料的前提物释放风味成分，牛产燃料乙醇，作为洗涤剂的有效成分。2)综述国内外有关本选题的研究动态和口己的见解卩■葡萄糊廿酶作为纤维素酶的一个重要组成部分，在医
3、疗、食品、生物质转化屮有重要的应用价值，特别是随着近年来环境能源等危机的加重，木质纤维素作为白然界最广泛的碳源受到各国政府的高度重视。卩■葡萄糖昔键的水解是纤维素彻底降解为单糖的一个瓶颈。釆用慕因工程•蛋白质工程手段获得优良的卩■葡萄糊廿酶已经成为研究热点。国外许多研究机构正致力于卩•匍萄糖廿酶的分子生物学研究。从基础领域研究陆的催化机制及表达调控机制，以期望更好改善纤维素酚的催化效率。随着表达系统的发展少完善，卩■葡萄糖营酶已经在大肠杆菌和酵母中得到高效表达。近年来在芽胞杆菌、丝状真菌以及植物中都有卩■葡萄糖昔陋重组农达的报道。国内近年来研究卩■葡萄糖昔卿已经成为热点,已由过去的研究卩■
4、匍萄糖廿酶的简单提取到现在的酶的培养条件优化以及粗酶液的纯化。卩胸萄糖廿齣基因的克隆表达已经得到实现，新构建的工程菌已经应用到生产实践。目前已知的纤维素酶产生菌株所产生的卩■匍萄糖廿酶的酶活普遍偏低，对这些菌株进行分子改造又耗时耗力。那么，从白然界屮玄接筛选卩•匍萄糖廿酶酚活较高的出发菌株，是获得卩-匍萄糖廿酶高产菌株的最直接有效的方法。此项实验就是从口然界中筛选出高产菌株从而研究其功能作用以及其臨学性质，以期更好的应用于生产实践。主要内容：实验方法：1、土壤样品：采集自湖南科技学院西山树下泥土。2、主要试剂：七叶背，高锚酸钾，其它试剂均为国产分析纯。3、培养基：富集筛选培养基(g/L):
5、蛋口J］东10,酵母浸膏3,氯化钠5,pH7.4-7.6；初筛培养基(g/L):蛋白月东10,酵母粉3,氯化钠5,七叶灵0」，柠檬酸铁鞍0.2,琼脂15,pH7.4-7.6o4、产陆菌株的筛选4.1初筛：取lg土样，加入10mL无菌水，振荡片刻，制成悬液，取ImL悬液于富集培养基中进行富集培养，37°C.180r/min培养24h。取富集培养液适当稀释后涂布于初筛培养基平板，37°C培养24h,用接种环挑取周围有黑色显色的单菌落进一步划线纯化。4.2复筛：将初筛到的菌株分别接种到LB培养基中,37°C^180r/min培养24-36h,发酵液12000r/min离心10min,收集上清液，
6、进行酶活力测定，每个菌株巫复3次。4.3卩•匍萄糖苜酶酶活测定：0.02mol/L的柠檬酸柠檬酸钠缓冲液(pH4.8)配制1%高镒酸钾溶液为底物，0.05mL适当浓度的酶液和1mL1%高镒酸钾溶液底物混匀，50°C反应30min,添加3mLDNS试剂终止反应，沸水浴6min然后冷水浴，波长510nm处测吸光度值。每分钟产牛.1pmol匍萄糖的酶量为1个酶活单位(U)。5^菌种鉴定5.1菌落形态观察:在平板上划线接种，35弋培养，连续几天观察菌落边缘和表而的质地、颜色、纹饰等形态变化。5.2显微形态观察：用压片法和插片法，在光学显微镜下观察菌丝、抱子丝和抱子等形态。5.3生理生化特性观察：生
7、理生化特征参照《伯杰系统细菌学鉴定手册》和《微生物分类学》。6、酶学性质实验6」酚的最适反应pH：用柠檬酸、NazHPO,Na2CO3配制缓冲液，用此缓冲液配制pH2.0-11.0的系列梯度酶液，37条件下分别测定酚活，以最高腮活为100%,其余为和対陆活，每组重复3次。6.2酚的最适反应温度：在最适pH条件下，在20°C.30弋、40°C>50°C.60°C.70°C>80七温度梯度下分别测定酶活，以最高酶活为100%
