植物组织培养实验指导手册

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1、《植物组织培养实验指导手册》生物科学教研室2015.9.1实验一MS培养基母液及培养基的配制一、实验冃的学会配制大量元素、微量元素、铁盐、冇机物成分等培养基母液；通过MS母液的配制,掌握配制培养基母液的基木技能。学会配制用MS培养基母液配置培养基；通过MS培养基的配制，学握配制培养基的基本技能。二、实验用具与材料移液管、标签、铅笔、量筒、烧杯、容量瓶、广口瓶、培养瓶、玻棒、电炉、PH试纸、电子天平、托盘天平等用具。硝酸钱、硝酸钾、EDTA、硫酸亚铁、U•氨酸、盐酸硫胺素、盐酸毗哆醇等药品、琼脂、蔗糖、0」mol/L的NaOH、O.lmol/L的HCL蒸係水等。三、

2、实验内容（一）MS培养基母液的配制1•大量元素母液的配制按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大10倍，用电子天平分别称取后各放入烧杯中,加蒸懈水约30-40ml溶解，然后混合按顺序定容于1000ml容量瓶中，转移到储液瓶中，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制LI期和配制者姓名。2.微最元素母液的配制按照培养基配方用量，把各种化合物扩人100倍，用电子天平分别称取后各放入烧杯中,加蒸懾水约50ml溶解，然后混合按顺序定容于100ml容量瓶中，转移到储液瓶中，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名。3.铁盐母液的配制按照培养基配

3、方的用最，把各种化合物扩大200倍，用电子天平分别称取后各放入烧杯•I',加蒸係水约400ml溶解，然后混合定容于1000ml容量瓶屮，转移到储液瓶屮，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制H期和配制者姓名。4.有机物成分的配制按照培养棊配方的川量，把各种化合物扩大200倍，用电了天平分别称取后各放入烧杯中，加蒸饰水约80ml溶解，然后混合定容于1000ml容量瓶中，转移到储液瓶中，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名。5.贮存母液最好在2〜4°C的冰箱屮贮存，特别是有机类物质，贮存时I'可不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用

4、完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。（二）培养基的配制配制MS培养基1000ml：1.取出母液并按顺序摆放好;2.収一只烧杯，依次将各种母液吸取并加入烧杯中，同吋称取5.4g琼脂粉，20g蔗糖;（1L的量）配制培养基的升数母液吸取量=母液体积x母液浓缩倍数3.取500ml或1000ml的大烧杯，加入200-300ml或400-500ml蒸饰水加热；4•将7g琼脂粉，30g蔗糖加入200-300ml或400-500ml蒸饰水，加热直至完全溶解为止;5.定容至或1000ml；6.调整pH值至5.8-6.0,过酸过碱则用1mol/LNaoH和1mol/LHCL调整

5、;7.分装：将1000ml培养基分装25・30只三和瓶屮，即每支三角瓶40ml左右。&包装:分装好的三角瓶用封口膜封好,并贴上标签，注明培养基的名称和配制时间4.用具清理和洗涤。9.高压蒸汽灭菌四、实验结果培养基配制完成。五、作业1、请回答大量母液、微量母液、铁盐母液、有机母液配制的方法及注意事项。2、简述常见激素母液配制方法及助溶剂选择。3、按培养基配制步骤完成实验报告，关键步骤详加描述。母液成分规定量(mg/L)浓缩倍数称取量(mg)母液体枳(mb)配1升培养基吸取量(mL)编号种类I人量■•兀素KN03190010190001000100NH.iN03165

6、01016500MgSOi.7H20370103700KH2PO4170101700钙土卜.rm.^aCl2.2H20

7、4401044001000100II微里元素MnS0i.4H2022.3100022301001ZnS04.7H20&61000860H3BO36.21000620KI0.83100083Na2Mo0i.7H200.25100025CuSOi.5H2O40.02510002.5CoCL2.6H：＞00.02510002.5III铁盐Na2-EDTA37.310037310010FeSOi.7H2027.8100278IV有机物甘氨酸2.01002

8、010010盐酸毗哆醇VB60.51005盐酸硫讓素VB10.41004烟酸0.51005肌醇1001001000注：标签注明化合物名称，浓缩倍数，配制口期和配制者姓名大量元素：单独称量，统一溶解，统一定容微量元素：分别称量，单独溶解，统一定容铁盐:将Na2-EDTA溶于40ml左右蒸係水屮加热煮沸，再将FeSO4-7H2O溶于Na2-EDTA煮沸溶液中，搅拌，再煮沸，定容至100ml,置于小口瓶中，贴上标签。有机母液：分别称量，单独溶解，统一定容，棕色瓶保存生长素(IAA0.5mg/ml)：称取50mgIAA,用少最95%酒精溶解后加蒸憎水定容至100ml。实验

9、二：实验器