微生物的生理生化实验实验报告

《微生物的生理生化实验实验报告》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、微生物的生理生化实验实验报告微生物的生理生化实验李越201500140086组员：隋心怡、王运泽、徐承鹏2016/11/26一.实验目的掌握几种常用的生理生化实验方法并了解其原理。（1.证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微牛物有着不同的酶系统。2•掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用。4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。5.了解“引口朵和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。）二.实验原理1.在所有生活细胞中存在的

2、全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主耍是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。1.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用，胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分了的糊精，双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产牛蓝色

3、，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉。在淀粉培养基上培养用碘处理:其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶2.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说明此中菌可产生分解油脂的酶3.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等）；

4、有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入澳甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管屮无气体。5.IMVIC实验主要用于快速鉴别人肠杆菌和产气肠杆菌。（1）卩引喙试验：是用来检测呵”朵的产生，在蛋口腺培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白豚中的色氨酸分解为丙酮酸和口引味，口引口朵与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰口引喙。但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生卩引喙的能力，所以眄P朵实验可以作为

5、一个生物化学检测的指标。大肠杆菌口引喙反应阳性，产气肠杆菌为阴性（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，培养基就会变酸,使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色，即甲基红反应。大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性一.实验材料菌种：枯草芽抱杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装冇倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）;蛋白月东水培养基

6、3引喙试验）；葡萄糖蛋白腺水培养基；试剂：卢戈氏碘液、乙醞、口引味试剂、甲基红试剂、蒸惚水等仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等二.实验方法1.淀粉水解实验（1）倒平板：按照淀粉培养基配方配制固体淀粉培养基，灭菌，待培养基冷却至50°C左右，在酒精灯火焰旁倒平板，每组两个平板。（2）用记号笔在平板底部划成四部分。（3）接种：在无菌操作台上，将枯草芽抱杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和铜绿假单胞菌分别在不同的部分点种，注意仅用接种针接触极少面积的培养基，在平板的反面对应部分贴上标签，标签上分别

7、写上菌名，以免混淆。（4）培养：将平板倒置，在28°C温箱中培养两天。（5）观察：取出培养基，观察各种细菌的生长情况，打开平板盖子，滴入少量卢戈氏碘液于平板中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板,观察培养皿屮菌落周围是否有无色透明圈，若有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解，为阳性，反之则为阴性。记录实验结果。1.油脂水解试验（1）倒平板：按照油脂培养基配方配制固体油脂培养基，灭菌，待培养基冷却至50°C左右，充分振荡，使油脂均匀分布，在酒精灯火焰下倒平板,每组两个平板。（2）用记号笔在在平板底部划成四部分。（3）

8、接种：在无菌操作台上将枯草芽抱杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和铜绿假单胞菌分别划十字线接种于平板相对应部分的屮心，并贴好标签，标签上注明菌种的名称。（4）培养：将平板倒置，在28°C温箱中培养两天。（5）观察：取出平板，观察菌苔颜色，如果出现红斑点，说明脂肪水解，为阳性反应。记录实验结果。油脂水解试验接种示意图1.葡萄糖发酵实验（1）培养基的配制：按照糖发酵培养基