瓯江彩鲤体色相关分子标记筛选和差减杂交的分析

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2、r密恢保、岔．?甜上海海洋大学博／硕士学位论文答辩委员会成员名单●姓名工作单位职称备注李思发上海海洋大学教授主

3、席章龙珍东海水产研究所研究员委员赵金良上海海洋大学教授委员’委员龚小玲上海海洋大学副教授秘书答辩地点C217答辩日期2010．6．11●■斑纹)、(粉白赏型选和筛选体色瓯江彩鲤的差减杂交文库，筛选与体色相关的差异表达基因，以期了解瓯江彩鲤体色变异的分子基础，为鱼类的体色遗传机制研究积累相关资料。一、瓯江彩鲤体色相关RAPD标记筛选与SCAR标记转化本章以“全红”、“大花”、“麻花”、“粉玉”、“粉花”五种体色瓯江彩鲤为材料，应用RAPD引物进行全基因扫描，筛选与体色相关的分子标记，将其转化为SCAR标记

4、。在筛选的1100条RAPD引物中，发现引物S495在“粉花"体色瓯江彩鲤中可以扩增出稳定的特异性片段，通过对此特异性片段的回收，克隆和测序，设计特异性引物将其成功转化为SCAR标记。通过大样本的检测，发现此SCAR标记在“粉花”体色中的出现概率达到70％，而在其他四种体色瓯江彩鲤(“全红"、“大花”、“麻花”、“粉玉")中没有出现。此SCAR标记可以用来做“粉花”体色瓯江彩鲤的早期鉴别。二、“全红”、‘‘粉玉”体色瓯江彩鲤的抑制性差减杂交为了解瓯江彩鲤红(“全红’’)、白(“粉玉’’)两种体色差异的分

5、子基础，本章应用抑制性差减杂交技术对这两种体色的差异表达基因进行了初步研究，以“全红”体色瓯江彩鲤的cDNA为Tester，以“粉玉”体色瓯江彩鲤的cDNA为Driver，进行抑制性差减杂交。对筛选出的42个阳性克隆进行测序和序列比对。结果发现有16条EST序列，其中6条为鲤的线粒体DNA序列，5条为斑马鱼的相关基因序列，l条为鲫鱼的mRNA序列，2条与无脊椎动物基因相类似，另2条为未知基因序列；比对结果发现4条序列可能与体色有关。本研究为进一步筛选鲤体色相关的功能基因奠定了基础。●■l：海海洋大学顾_

6、{二学位论文三、“全红”、“大花”体色瓯江彩鲤的抑制性差减杂交本章以“大花”体色瓯江彩鲤的cDNA为Tester，以“全红”体色瓯江彩鲤的cDNA为Driver，进行抑制性差减杂交。测序得到116条EST序列，其中35条为斑马鱼的相关基因序列，49条为鲤的相关基因序列，2条为绿河豚的相关基因序列，30条为未知功能的序列。在这些序列中，发现一些可能与体色有关的基因序列，与能量代谢有关的基因序列，与绿河豚相关的cDNA序列等。研究结果为进一步研究鲤的体色遗传打下了基础。四、五种体色瓯江彩鲤遗传差异的ISSR

7、分析以五种体色瓯江彩鲤(“全红”、“大花”、“麻花”、“粉玉”、“粉花”)观赏型选育系F5为材料，用ISSR标记进行全基因组扫描，筛选与体色相关的ISSR标记，分析5个观赏型选育系的遗传变异。但结果未发现与体色相关的特异性ISSR分子标记；在遗传变异分析的11条ISSR引物扩增结果中，五种体色观赏型选育系已发生较大程度的遗传分化，“大花"与“麻花"体色的遗传距离最小，遗传相似度最高，“粉玉"与“粉花”体色的遗传距离最远，遗传相似度最低。这一结果也与瓯江彩鲤体色之间的差异状况基本吻合。研究结果为今后观赏型

8、瓯江彩鲤的选育提供了资料。关键词：瓯江彩鲤，体色，分子标记，抑制性差减杂交，差异表达基因，遗传关系●blackspots’，，‘'Wholeredwithsmallblackspots”，“Wholewhite'’and“Wholewhitewithbigblackspots”)wereemployedforexaminingandscreeningspecificmolecularmarkerassociatedwithbodycolortypesbyusingRAPD(RandomAmplified

9、PolymorphicDNA)andSCAR(SequenceCharacterizedAmplifiedRegion)markers．Meanwhile，theSuppressionSubtractiveHybridization(SSH)methodwasusedtodetectthedifferentiallyexpressedgenesamongdifferentbodycolortypesofthisspecies．Themain