体外培养人眼小梁细胞血管紧张素ⅱ的表达

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1、独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：2008年5月1日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数

2、据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在_____年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日华中科技大学硕士学位论文体外培养人眼小梁细胞血管紧张素Ⅱ的表达华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科硕士研究生：章艳导师：熊新春教授中文摘要目的传代培养人眼小梁细胞并用不同方法检测血管紧张素Ⅱ在体外培养的人眼小梁细胞中的表达，探讨肾素血管紧张素系统（renin-angiotensinsystymRAS）通过自分泌、旁分泌和（或）胞内分泌参

3、与眼压调节的方式，为眼压的自稳与调节研究开辟新思路，为研究治疗青光眼的新药提供理论依据。方法人眼小梁细胞进行常规传代培养，取第二代小梁细胞融合后消化培养制作细胞爬片，爬片细胞经免疫组织化学SP法检测确定小梁细胞胞浆中有血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡⅡAng）的表达；取第三代近融合小梁细胞经Westernblot方法检测细胞中AngⅡ蛋白的表达。结果1通过免疫组化染色显示：AngⅡ在体外培养的人眼小梁细胞中表达呈强阳性，表现为细胞胞浆中棕黄色阳性颗粒，细胞核衬染为兰紫色，对照胞浆内未见阳性信号。2Westen-blot方法显示人眼小梁细胞中A

4、ngⅡ蛋白的表达呈阳性。结论1体外人眼小梁细胞的培养是进行青光眼研究的重要方法。2经免疫组织化学及Westernblot法检测体外培养人眼小梁细胞内AngⅡ的表达均为阳性，说明人眼小梁细胞具有独立合成AngⅡ的能力，推测RAS可能参与了眼压的自稳与调节并参与了小梁组织的生理病理性改变，与青光眼的发病有关。关键词人小梁细胞血管紧张素Ⅱ1华中科技大学硕士学位论文ExpressionofAngiotensinⅡinCulturedHumanTrabecularMeshworkCellsPostgraduate:ZhangyanTutor:Prof.Xio

5、ngXingchunAbstractObjectiveTostudywhetherculturedhumantrabecularmeshworkcellsexpressAngⅡinvitro,andtoexplorethewayRASparticipateintheregulationofintraculartensionandtodevelopanewwayfortheself-ballanceandregulationofintraoculartension.MethodsThehumantrabecularmeshworkcellswerec

6、ulturedinvitroandpassaged2times，thenthecellsweretransferedorculturedontosteriledcoverglass.Immunohistochemicaltechnique-SupervisionmethodwasusedtolocalizetheAngⅡproteininhumantrabecularmeshworkcells.WesternblotwasappliedtodeterminetheexistenceofAngⅡproteininhumantrabecularmesh

7、workcells.ResultsHumantrabecularmeshworkcellsshowedyellow-brownstaininginthemembraneandcytoplasm,indicatingapositiveexpressionofAngⅡ.Therewasnopositivestaininnegativecontrol.AngⅡproteinwasfoundinhumantrabecularmeshworkcells.ConclusionTheresultimpliesthathumantrabecularmeshwork

8、cellshavetheabilityofsynthesizingAngⅡ.ItsuggeststhatAngⅡmaypl