产叶酸菌株筛选、生物学特性的研究和发酵条件优化

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1、浙江工业大学硕士学位论文产叶酸菌株的筛选、生物学特性研究和发酵条件优化姓名：徐玲燕申请学位级别：硕士专业：食品科学指导教师：孟祥河201204浙江工业大学硕士学位论文产叶酸菌株的筛选、生物学特性研究和发酵条件优化产叶酸菌株的筛选、生长特性的研究和发酵条件优化摘要本研究从土壤、菠菜和水中选择性筛选得到120株菌株，进行产叶酸菌株的定性筛选，得到了34株产叶酸的菌株，再用高效液相色谱法进行定量分析，确定6株叶酸产量相对较高的菌株，命名为Ra．1、Ra一10、Ra．18、Rb一8、Rc一6、Sc一1。通过生理生化试

2、验，16SrcINA序列系统和发育树分析，将测得的上述序列在GenBank中进行Blast同源性搜索，结果显示菌株Ra．1、Ra一10、Ra．18、Rb．8、Rc．6与植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)的同源性达到了99％．100％，确定为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)；Sc一1与嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)的同源性达到了99％一100％，确定为嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)。叶酸的检测方

3、法很多，本实验选用了高效液相色谱和荧光检测法(高锰酸钾和双氧水)，比较了这三种方法的优缺点，结果显示高效液相色谱法检测O．65pg／mL叶酸标准溶液的准确率为98．9％，高锰酸钾氧化荧光法为98％，双氧水氧化荧光法相对较低，为94．2％；考虑实验的操作性，高锰酸钾荧光检测结果与高效液相色谱法检测结果更接近，准确性和稳定性高，故实验采用高锰酸钾荧光法检测叶酸浓度。同时研究6株菌的生长动力学特性，得出各菌株最适生长温度，乳酸菌属为37℃，嗜热链球菌为30℃。将各菌株分别在最适生长的条件下培养，分别测定胞内和胞外的

4、叶酸含量，此时胞内叶酸产量是胞I浙江工业大学硕士学位论文产叶酸菌株的筛选、生物学特性研究和发酵条件优化外叶酸量的2倍左右，由于6株菌最佳胞内叶酸产量的时间跟胞外叶酸的最高产时间不～致，综合考虑了实验操作的可行性和降低成本，且发酵液可大量收集得到胞外叶酸，因而本实验后期主要研究了菌株胞外产叶酸的质量浓度优化。在不同的培养条件下，加入优化物质的情况下比较产叶酸能力，进行单因素试验和正交分析，同时重复试验3次，分析得出各菌种的最佳发酵产叶酸条件。结果显示，菌株Ra一1的最佳产叶酸条件是葡萄糖259／L，柠檬酸铵49

5、／L，P．A。BA0．39／L，接种量2％，培养时间24h，初始pH6．5，叶酸产量达到了1．92Bg／mL；菌株Ra-10产叶酸的最佳反应条件为：葡萄糖209／L，柠檬酸铵49／L，，PABA0．39／L，接种量3％(v／v)，培养时间48h，初始pH6．0，叶酸产量为1．7899／mL；菌株Ra．18产叶酸的最佳反应条件为：葡萄糖209／L，蛋白胨39／t,，PABA0．39／L，接种量2％(v／v)，培：养时间24h，初始pH6．0，叶酸产量为1．4199／mL；菌株Rb一8产叶酸的最佳反应条件为：蔗糖

6、209／L，柠檬酸铵49／L，PABAO．59／L，接种量3％(v／v)，：暗养时间48h，初始pH6．5，叶酸产量为1．2799／mL；菌株Rc一6产叶酸的最佳反应条件为：葡萄糖259／L，酵母粉49／L，PABA0．39／L，接种量3％(v／v)，培养时间48h，初始pH6．5，叶酸产量为1．27I，tg／mL；菌株Sc一1最佳产叶酸条件是蔗糖259／L，柠檬酸铵29／L，PA。BA0．39／L，接种量2％，培养时间48h，初始pH5．5，叶酸产量为1．31gg／mL。关键词：乳酸菌，嗜热链球菌，叶酸，优

7、化，生物学特性，检测方法浙江工业大学硕士学位论文产叶酸菌株的筛选、生物学特性研究和发酵条件优化SCREENlNGoFFoLlCACIDPRODUCINGSTRAINS，STUDYoNITSBloLoGICALCHARACTERISTICSANDOPTIMlZATIoNOFFERMENTATIONCoNDITIoNABSTRACTThepapermainlyfocusedonscreeningoffolicacid—producingstrains，&omthesoil，spinachandwater．Afte

8、rqualitativescreeningfolicacid—producingstrains，34strains，whichhavetheabilityofproducingfolicacid，wereobtained．Sixstrains，namedRa一1，Ra一10，Ra一18，Rb一8，Rc一6andSc一1，producingrelativelyhighfolicacidweresele