dna甲基化在帕金森病发病机制中的研究

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1、中南大学博士学位论文DNA甲基化在帕金森病发病机制中的研究姓名：胡雅岑申请学位级别：博士专业：神经病学指导教师：唐北沙20120530博士学位论文中文摘要摘要第一部分散发帕金森病患者外周血单个核细胞DNA总体甲基化及DNMTs、MBPs表达水平研究背景帕金森病(Parkison’Sdisease，PD)的发病机制尚不完全清楚，目前认为与遗传因素和环境因素及其相互作用有关。表观遗传学为人们探索帕金森病的发病机制提供了新的思路。DNA甲基化是发现最早的、最基本的，也是研究最多的表观遗传学机制。DNA甲基化与疾病的关系已逐

2、渐成为医学研究的新热点之一。DNA甲基化具有组织特异性，而中枢神经系统疾病取材脑组织的难度较大，且难以作为后续开展生物标记研究的依据。某些DNA甲基化改变在脑组织和外周血中具有一致性，在精神疾病和神经退行性疾病研究领域，利用外周血标本开展DNA甲基化的研究取得了～定进展。PD作为一种全身受累的疾病，外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs)是研究PD患者多巴胺能神经元变性损伤的一种很好的外周模型。PD患者外周血中是否存在DNA总体甲基化水平、DNA甲基转移酶(DNA

3、methyltransferases，DNMTs)及甲基化CpG结合蛋白(methylbindingprotein，MBPs)的表达异常，目前国内外尚无研究。目的探讨散发PD患者PBMCs中是否存在DNA总体甲基化水平、DNMTs及MBPs表达水平的异常，并结合各临床参数探讨年龄、性本研究由以下基金联合资助：国家重点基础研究发展计划“973计划”(2011CB504100)国家自然科学基金项目(No．30971035)本研究部分工作在中国医学遗传学国家重点实验室完成l博士学位论文中文摘要别、药物使用对DNA总体甲基化

4、水平、DNMTs及MBPs表达水平的影响。方法应用酶联免疫吸附(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)技术对63例正常对照和62例散发PD患者PBMCs中DNA总体甲基化水平进行检测；应用实时荧光定量PCR进行DNMTs及MBPs的表达水平的检测；应用统计学方法对两组的测定值进行比较。馇里掌口爿写1．散发PD患者PBMCs中DNA总体甲基化水平较正常对照降低(正常对照组10．33％4-0．88％VS．PD组9．92％+0．98％，P<0．05)；男。I'生PD的DNA总体甲基化水平

5、较男性对照显著降低(男性对照10．44％+0．89％VS．男性PD9．88％士O．88％，P<0．05)，而女性PD和女性对照的总体甲基化水平无显著差异(P>O．05)。2．病程、年龄、发病年龄以及L．dopa使用对于本组实验对象DNA总体甲基化水平无显著影响(．P>O．05)；3．与正常对照相比，散发PD患者PBMCs中DNMTs及MBPs的mRNA表达水平均显著增高(P<0．05)；4．在本组PD患者中PBMCs中：DNMT3A的mRNA表达水平和年龄呈负相关(r。=一O．294，P<0．05)；MBD4的mRN

6、A表达水平和年龄呈正相关(rs=0．238，P<0．05)；DNMT3A的mRNA表达水平在男性患者显著低于女性患者(男性PDO．59+0．26VS．女性PD0．83+0．34，P<0．05)；MBD3的mRNA表达水平在使用L．dopa治疗的患者显著降低(NLOPD组1．21+0．34VS．LDPD组1．03士O．22，P<0．05)。5．在本组PD患者PBMCs中，DNA总体甲基化水平与DNMTl和MBDl的mRNA表达水平呈负相关(r。[DNMTi]=--0．497，P<0．05，rs[MBDI]=一II博士学

7、位论文中文摘要0．265，P<0．05)。结论在国内外首次开展了散发PD患者PBMCs中DNA总体甲基化水平、DNMTs及MBPs表达水平的检测，散发性PD患者PBMCs中存在DNA总体甲基化水平、DNMTs及MBPs表达水平异常。年龄、性别、药物使用可影响PD患者的DNA甲基化状态。关键词外周血单个核细胞，DNA总体甲基化，DNA甲基转移酶，甲基化CpG结合蛋白III博士学位论文中文摘要第二部分MPTP诱导小鼠PD模型黑质部位DNA甲基化研究背景散发PD患者PBMCs中存在DNA甲基化异常，而PD主要病理改变主要位

8、于中脑黑质，因此研究黑质部位的DNA甲基化具有重要意义。MPTP诱导的小鼠PD模型是研究PD发病机制、神经生化、病理解剖、运动及精神障碍、药物作用等方面的应用最广的动物模型。MPTP作为最早被发现的、最经典的可导致选择性黑质部位多巴胺能神经元变性损伤的环境因素，其毒性作用依赖N．甲基基团的存在。在PD患者和MPTP诱导的动物模型的黑质部位存在蛋