参芎注射液对腹膜透析液诱导的腹膜间皮细胞损伤的干预作用研究

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1、湖北中医药大学博士学位论文参芎注射液对腹膜透析液诱导的腹膜间皮细胞损伤的干预作用研究姓名：熊飞申请学位级别：博士专业：中医内科学指导教师：王小琴20120529中文摘要背景：腹膜功能衰竭已成为终末期肾功能不全(ESRD)患者腹膜透析技术性失败的最重要的原因，并成为制约腹膜透析(PD)发展的“瓶颈"。研究表明完整的间皮细胞层可以显著廷缓腹膜超滤衰竭的进程，组织病理学也证实腹膜功能衰竭早期的重要特征表现为腹膜间皮细胞(PMC)的损伤和腹膜上皮一间皮细胞转分化(EMT)。因此，防治腹膜纤维化的重要靶点是阻止或逆转腹膜间皮细胞损伤的发生或治疗E

2、MT所导致的后果如细胞的移行、细胞外基质(ECM)的合成增多。转化生长因子一D(TGF-D)是EMT过程中关键的细胞因子，如果能抑制TGF-D的过度表达，就能抑制其下游相应的细胞因子，从而减缓EMT的发生和发展，维护PMC的结构和功能，维持正常的腹膜功能。目的l通过观察高糖腹透液诱导的大鼠腹膜纤维化模型，揭示其对腹膜超滤功能的影响及对PMC的形态、数量及功能变化规律，以及TGF-D1、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、带状封闭蛋白一1(ZO-1)、水通道蛋白一1(AQP一1)等细胞因子在腹膜组织中的表达情况。并通过中药复方制剂参芎注射

3、液进行干预，探讨在大鼠腹膜纤维化过程中参芎注射液对PMC保护的可能机制。并通过临床研究，观察参芎注射液对腹透患者超滤量的影响及其对PMC的保护作用。方法：1、大鼠腹膜透析模型的建立及超滤量的观察：SD大鼠分A、B两组，均给予4．25％腹透液(PDF)透析，A组透析剂量为100ml／Kg，B组透析剂量为200ml／Kg；分别测定两组在1h、2h、3h、4h超滤量。2、动物实验部分：建立高糖诱导的大鼠腹膜纤维化模型，4o只大鼠随机分为空白组、模型组、低剂量组和高剂量组，每组1o只。空白组：不作任何处理和干预；模型组：4．25％PDF100m

4、l／Kg腹腔注射，每日1次；低剂量组：4．25％PDF87．5ml／Kg+参芎注射液12．5ml／Kg腹腔注射，每日1次；高剂量组：4．25％PDF75ml／Kg+参芎注射液25ml／Kg腹腔注射，每日1次。实验4周后处死大鼠作检测。行4h腹膜平衡试验(PET)，测定透析液肌酐浓度(Dcr)，血浆肌酐浓度(Pcr)，初始腹膜透析液葡萄糖浓度(DO)，4h透析液葡萄糖浓度(D4)，计算D／Pcr、D4／D0。计量各组大鼠PD平均超滤量。大鼠腹膜行腿和VG染色，采用Image-ProPlus6．0图像分析系统测量间皮下红色的纤维组织厚度。大

5、鼠腹膜标本行超薄切片，透射电子显微镜观察病理改变。电化学发光法检测腹透引流液中CAl25浓度，计算CAl25表达率。免疫组织化学法检测腹膜TGF-p1、bFGF、ZO-1、AQP-1表达水平。选择背景清晰且阳性表达好的切片作统计学分析，每张切片随机选择10个高倍视野(200×)，计数阳性细胞，以10个高倍视野总数作为阳性细胞数。3、临床研究部分：选择武汉市中西医结合医院64例病情稳定，透析时间超过3个月的腹透患者，予参芎葡萄糖注射液50ml加入每袋(2L)腹透液，行标准CAPD，疗程为7天。治疗前后行标准腹膜平衡试验，生化指标检测，腹透

6、引流液CAl25浓度检测，计算透析前后的尿素清除指数(KT／V)，肌酐清除率(Ccr)。4、统计学方法统计软件为SPSS17．0，实验结果均为定量数据，用均数±标准差(X±s)表示，各组间差异性比较采用单因素方差分析并进行两两比较(LSD法)，P<0．05(双侧)为差异有显著性意义。结果ll、大鼠超滤量实验部分：A、B两组在留腹1h、2h、3h、4h的超滤量均逐渐增加，A组2h平均超滤量为10．46ml，较1h的平均超滤量9．57ml增加无显著差异(p>0．05)，A组3h、4h平均超滤量12．85ml和13．84ml较1h和2h超滤量

7、增加均有显著差异(p<0．05)。B组2h平均超滤量11．14ml，较1h的9．15ml增加有显著差异(p<0．05)；B组3h、4h的超滤量15．09ml和16．1ml较1h、2h增加均有显著差异(p<0．05)。B组第3h、4h超滤量显著高于A组同时间段的超滤量(p<0．05)。2、空白组、模型组、低剂量组和高剂量组之间超滤量的比较，空白组的平均超滤量为13．75土1．17ml，较模型组4．53±1．10ml明显高，低剂量组的超滤量有明显改善，达到7．46土I．23mi，高剂量组有更为显著的改善，为9．73士1．11ml。经统计学处

8、理各组间均有显著性差异(P<0．05)．3、空白组、模型组、低剂量组和高剂量组之间腹膜转运功能的比较，D／Pcr以模型组升高最为显著，达到0．84±0．07，较空白组0．53±0．03升高明显。低剂量组和高