抗猪瘟病毒转基因猪的初步研究

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1、APreliminarystudyonproductingoftransgenicpigforresistclassicalswinefeverVlrusinlecUon一■●n』■Thesissubmittedto(趸ngdao内以c“厉“纪厂U佗勿P船Z砂InFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeof—MasterofAgronomyQuHonglei(CollegeofAnimalScienceandTechnologySupervisor：SongXuexiongQingdao．ChinaJune，

2、2012学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。如不实，本人负全部责任。学位论文作者签名：均凌磊签字日期少／≯年多月矽日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库

3、进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：均澎、磊签字日期：．M)，年夕月彤日导师签字：拜锄I『五签字日期：年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要抗猪瘟病毒转基因猪的初步研究摘要猪瘟(ClassicalSwineFever，CSF)是一种由猪瘟病毒(ClassicalSwineFevervirus，CSFV)91起的急性、热性和高度接触性的传染病，流行广泛，发病率及死亡率高，危害极大，给养猪业尤其规模化养猪业造成严重经济损失。世界动物卫生组织(OIE)将本病列入A类法定传染

4、病，在我国制定的《家畜家禽防疫条例实施细则》中也被列为一类传染病。因此加快抗猪瘟病毒猪新品种的培育研究，控制猪瘟病毒的广泛传播具有重大的现实意义，本研究通过精子介导法成功构建出抗猪瘟病毒转基因猪。研究一：本研究旨在为构建抗猪瘟病毒转基因克隆胚胎建立供核细胞系和基因转染体系，为抗猪瘟病毒转基因克隆猪的研究提供参考。取体长10．15cm的大白猪胚胎，采用组织块培养法分离培养大白猪胎儿成纤维细胞(Porcinefetusfibroblasts，PFF)，脂质体介导法将含有抗猪瘟病毒基因的重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞中，探索影响pGPHl／GFP／Neo

5、质粒DNA转染猪胎儿成纤维细胞的最佳条件。结果显示，2．5山脂质体转染1．2嵋质粒DNA6h转染率最高32．5％。但是超过上述脂质体用量和质粒DNA浓度以及转染时间，转染率反而降低，引起细胞的皱缩及死亡。本研究成功建立了猪胎儿成纤维细胞系，并有效转染了含有抗猪瘟病毒基因的重组pGPHl／GFP／NeoDNA，优化了转染条件，获得了转抗猪瘟病毒基因的供核细胞。研究二：本研究旨在利用精子介导法构建抗猪瘟病毒转基因猪，为抗猪瘟病毒转基因猪新品种培育奠定基础。将线性化的抗猪瘟病毒重组质粒DNA与离心洗涤后的猪精子17"C共孵育2h，周转染后的精子对自然发

6、情的受体母猪进行人工输精。在输精的5头受体母猪中有4头妊娠，共分娩42头仔猪，其中有12头木乃伊死胎，分娩时成活仔猪30头。采集成活仔猪耳组织提取DNA进行PCR检测，共检测出10头转基因阳性仔猪，转基因阳性率33．3％。关键词：精子介导；转基因猪；抗猪瘟病毒；脂质体；猪胎儿成纤维细胞青岛农业大学硕士学位论文ABSl砌LCTProductionoftransgenicpigwhichcanresist-·o●一●^·-’classicalSWlnefeverVlrusiniectionlaysperm—·mediatedgenetransferA

7、bstractClassicalswinefever(CSF)isakindofacute，febrileandhi．ghlycontagiousdiseasethatcausedbytheClassicalSwineFevervirus(CSFV)．CSFcancausegreatdamagestOthedomesticandinternationalpigbreedingindustryasitischaracterizedbyhigh-contagious，highmorbidityandwiderangeoftransmission．Of

8、ficeInternationalDesEpizooties(ore)hascategorizedCSFasAclassinfectio