急性白血病分型流式细胞术免疫分型在急性髓细胞白血病诊断中的应用

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1、急性白血病分型流式细胞术免疫分型在急性髓细胞白血病诊断中的应用导读:就爱阅读网友为您分享以下“流式细胞术免疫分型在急性髓细胞白血病诊断中的应用”资讯，希望对您有所帮助，感谢您对92to.com的支持!•157-•综流式细胞术免疫分型在急性髓细胞白血病诊断中的应用江西省抚州市医学科学研究所(344000)南昌大学第一附属医院述.何文英彭宽流在医学研究领域中，流式细胞仪(flowcytometer,FCM)能够快速分析单个细胞的多种特性，它既可以定性也可以定量，适用于大量标本的检测。流式细胞仪可以为全血.骨髓.渗出液、脑脊液.尿液和固体组

2、织等很多的样本进行免疫分型，并可检测细胞大小.胞质内容物.DNA、RNA及大量的膜蛋白和胞内蛋白。临床上采用的急性白血病法，美.英协作组分类标准(FAB)分类方法是基于形态与细胞学检査基础，但这种方法对于来源于同一系列的急性白血病间的鉴别不甚理想，甚至有时对于不同系列的白血病鉴别也较困难［l］o对伴有髓系抗原表达的急性淋巴细胞白血病(ALL).伴有淋系抗原表达的急性髓细胞白血病(AML)、区分T-ALL和B-ALL、急性混合型以及细胞形态特征不典型的白血病等的诊断也较困难。自从Foon与Todd在1986年提出白血病免疫分型以来，FC

3、M己成为诊断血液系统恶性肿瘤不可缺少的重要工广泛应用于白血病的临床检测［2］o其突出的优势是能在分子水平对细胞的理化性质和免疫学特征进行简单.快捷.定性.定量分析，且能够检测残存白血病或标本中幼稚细胞低于50%的白血病［3］。精确的流式细胞仪技术免疫分型通过分析白血病细胞群中特异抗原(CD)的表达特点，不仅能够给诊断提供客观的指标，而且能够根据某些抗原表达的情况来研究疾病的发展和判断预后［4］。以下阐述流式细胞仪技术免疫分型在急性髓细胞白血病诊断中的应用。1流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的结构一般可分为5个部分：①流动室及液流驱动系统

4、；②激光光源及光束成形系统；③光学系统；④信号检测与存储、显示.分析系统；⑤细胞分选系统。流式细胞仪可以检测单个细胞的可见光和荧光特性。通过检测细胞大小和内容物等物理特性可以对细胞进行分群。荧光染料可以连接或插入到DNA、RNA等细胞内容物中。另外，荧光染料连接的抗体能够与细胞膜上或其内部的特异蛋白结合。当标记细胞通过光源时，荧光分子被激发到较高的能级。当其回到基态后，荧光染料在较长的波长上释放光能。流式细胞仪通常使用激光作为激发光源，激发光向各个方向散射,通过一系列的滤光片和双色性反光镜的分离，形成不同波长的荧光信号。光信号经光电倍

5、增管接收后转换为电信号，经数/模转换器转换为可被计算机识别的数字信号。检测数据可以直方图和二维散点图表示[5,6]FCM白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体通信作者：彭宽McAb）作为分子探针，多参数分析白血病细胞的抗原表型，由此确定被测白血病细胞所属细胞系列及分化程度。样品需要用活细胞，如果是血液和骨髓，需要把红细胞分离开（氯化氨溶解或密度梯度离心）。现今国际上通用的是CD45/SSC设门法⑺，即用CD45与侧向角（sidescatter,SSC）对数取样后，可将骨髓细胞清晰地分出淋巴细胞、单核细胞、成熟粒细胞.幼稚细胞和红细

6、胞群。其理论依据:CD45是所有白细胞的抗原，其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞.成熟粒细胞.早期造血细胞依次减弱，红细胞（中、晚幼红细胞、成熟红细胞）不表达CD45[8]oSSC反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞SSC最高，依次为单核细胞.淋巴细胞.胚胞（blasts）、红细胞。这种方法须采用第三色或第四色荧光标记CD,同时配合两种或三种荧光标记的单克隆抗体，则很容易测出非正常细胞群的抗原表达，同时排除正常细胞的干扰。2FCM免疫分型在急性髓细胞白血病诊断中的应用AML以前称为急性非淋巴细胞白血病（ANLL）,是一种高度异质性的造血系统恶性

7、克隆性疾病，这类白血病细胞的免疫表达种类繁杂，缺乏特异性和敏感性（与ALL相比）,其免疫分型如下，见第158页表1。2.1AML-MO:1987年正式确定的极微分化型AML,以AML-MO来表示，到1991年才通行到全世界。这个类型是免疫标记技术在AML中应用的一个范例。可以这样说，没有免疫标记在白血病分型中的应用，就不可能诊断AML-MOoAML-MO通常是TdT（terminaldeoxynucleo,transferase,末端脱氧核昔转移酶）阴性.淋巴抗原阴性和<3%的髓过氧化物酶MPO）表达,而以CD6久CD13、CD

8、14和CD33中的1个或2个阳性表达为主。其中CD68表达率为45%,CD14为13%,CD33为32%,某一分化抗原单独阳性的为52%,两个分化抗原阳性的占40%左右，两个以上阳性的不超过5%。2.2AML-M1：由于