桑白皮抗mrsa活性成分研究

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1、云南中医学院硕士学位论文桑白皮抗MRSA活性成分研究姓名：杨翠先申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：左国营201205桑白皮抗MRSA活性成分研究中文摘要目的：1．筛选桑科桑属植物桑白皮(MorusalbaL．)的抗临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methieillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA)等病原菌的有效部位，明确活性单体成分的化学结构。2．测定桑白皮中活性单体化合物对MRSA等病原菌的抗菌活性强度，在此基础上进一步探讨其作用方式，测定活性单体化合物与常用抗菌素联合抗MRSA作用

2、的方式。3．研究部分活性单体化合物对人肝细胞株HL．7702和肺癌细胞株A549的细胞毒性。方法：1．以生物活性导向分离(bioactivity-guidedfractionation)的方法，即结合细菌药物敏感性试验，采用溶剂萃取、柱色谱分离和测定抑菌圈等方法，筛选桑白皮中具有抗MRSA活性的部位并跟踪筛选活性部位的色谱分段产物，对高活性的色谱片段进一步分离纯化得到活性单体化合物，结合现代波谱分析技术和理化方法鉴定其结构。2．对分离得到的活性单体化合物进行系统的抗MRSA等病原菌活性的研究；采用微量稀释法测定其直接作用的最低抑菌

3、浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。根据测定结果，采用纸片扩散法(Diskdiffusionmethod)筛选与单体化合物有联合抗菌作用的抗菌剂，进一步采用微量棋盘稀释法(Checkboardmicrodilutionmethod)和时间．杀菌曲线法(Time．killingcurve)评价化合物与所筛选出的抗菌剂的联合作用方式。3．采用MTS[3一(4，5一dimethylthiazol-2-y1)-5一(3。carboxymethoxyphenyl)一2一(4_sulfophenyl)．2H．tetrazolium]'法，

4、通过测定吸光度(0D)值来评价化合物对人肝细胞株HL．7702和肺癌细胞株A549的细胞毒性活性。结果：．1．从桑白皮提取物的乙酸乙酯活性部位中分离得到11个活性单体化合物，经理化性质及波谱数据鉴定其化学结构为：Cyclocommunol(化合物1)、2中文摘要Multicaulisin(化合物2)、SanggenonG(化合物3)、Moursinol(化合物4)、Momsin(化合物5)、AlbanolA(MulberrofuranG)(4L合物6)、p．谷甾醇(化合物7)、MoracinM(化合物8)、AlbaninG(Kuw

5、anonH)(化合物9)、㈣一oxyresveraterol(化合物10)、KuwanonE(化合物11)。2．微量稀释法结果显示，化合物1、2、3、9、11对MRSA作用最强，其MIC范围为2-1699／mL，MBC范围为8-1281．tg／mL：化合物5、6、8、10对MRSA作用次之，其MIC范围为8-128pg／mL，MBC范围为32—256}tg／mL；化合物4、7的抗MRSA活性最弱，其MIC值均___512肛g／mL，MBC值大于1024斗g／mL。3．受试单体化合物与临床常用抗菌剂联合作用方式考察的结果显示：(1)

6、纸片扩散法筛选出来的抗菌剂主要为氨基糖苷类、喹诺酮类及糖肽类。(2)微量稀释棋盘法实验结果显示：化合物l与庆大霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、万古霉素等联合用药的FICI在O．375～1．062之间，多数表现为相加或无关作用；化合物2与庆大霉素、阿米卡星及依替米星联合抗MRSA的FICI范围为0．25～l，表现为协同或相加作用；化合物3与阿米卡星、依替米星联合作用的FICI范围为0．375～0．75，表现为协同或相加作用；化合物4与阿米卡星、链霉素、环丙沙星、万古霉素及替考拉宁联合的FICI范围为O．094--0．75，表现为协同、相

7、加作用：化合物5与阿米卡星、依替米星联合作用FICI范围为0．188～1，表现为协同或相加作用：化合物8与庆大霉素、依替米星联合应用FICI范围为O．25～0．75，表现为协同或相加作用；化合物9与阿米卡星、左氧氟沙星联合作用FICI范围为O．188～1．5，表现为协同、相加或无关作用；化合物ll与依替米星、阿米卡星联合作用FICI范围为0．259～1，表现为协同或相加作用。(3)时间杀菌曲线法实验结果显示：化合物1、2、5与抗菌素在24h时单用与联用相比，其logl0CFU／mL降低值均在O~．之间，表现为无关作用；化合物3与阿

8、米卡星联合时其logloCFU／mL降低值大于2，表现为协同作用，与依替米星联合时Alogl0CFU／mL在1～2之间，表现为相加作用；化合物4、8与抗菌素联用的Alogl0CFU／mL在O~2之间，表现为相加或无关作用；化合物9与阿米卡星及左氧氟