苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒囊膜蛋白gp64与寄主细胞互作蛋白的初步鉴定

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1、苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒囊膜蛋白GP64与寄主细胞互作蛋白的初步鉴定杨锐冯敏吴小锋浙江大学动物科学学院摘要：鉴定杆状病毒与宿主昆虫细胞间的互作蛋口，对于进一步研究病毒受体的特性与功能，理解病毒与宿主细胞的相互作用关系具有重要意义。为了阐明苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)出芽型病毒粒子(BV)囊膜蛋白GP64是否与宿主细胞表面蛋白存在互作，利用蛋白酶K消化处理Tn细胞系的细胞膜蛋白，结果表明BV不能感染经300ng/mL蛋白酶K消化处理的Tn细胞，免疫荧光检测BV病毒粒子不能吸附于Tn细胞膜上。利用病毒覆盖蛋白印迹实验(V0PBA)及质谱初步鉴定的结果显示，Tn细

2、胞膜上的翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)是与BV囊膜蛋白GP64互作的候选蛋白。关键词：苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒;出芽型病毒;GP64蛋白；互作蛋白;作者简介：杨锐(1985—),男，博士研究生。E-mail:yrsla.m@163.com作者简介：吴小锋，教授，博士生导师。E-mail:wuxiaofeng@zju.edu.cn收稿日期：2017-04-25基金：国家自然科学基金项目(No.31472146)IdentificationofHostCellProteinInteractingwithEnvelopeProteinGP64ofAutographacalifor

3、nicaMulticapsidNucleopolyhedrovirusYangRuiFengMinWuXiaofengCollegeofAnimalScience,ZhejiangUniversity;Abstract：Tdentificationofinsectcel1proteinsinteractingwithbaculovirusisofsignificeintimpoTtanccforfurthcrcxplorationoncharactcristicsandfunctionsofvirusreceptorsandforunderstandingtheintera

4、ctionbetweenvirusandhostcell.ToidentifycellmembraneproteinsinteractingwithenvelopeproteinGP64ofbuddedvirus(BV)ofAutographacalifornicamulticapsidnucleopolyhedrovirus(AcMNPV),cel1membraneprotoinsofTncellsweredigestedwithprotcascK.ThercsuItrevealedthatBVcouldnotinfectTncellsthathadbeendigeste

5、dwith300ug/mLproteaseK.ImmunofluorescenceassaydisplayedthatBVvirusparticlescouldnotattachontoTncellmembrane.Usingvirusoverlayproteinbindingassay(VOPBA)andmassspectrometry,translationally_controlledtumorprotein(TCTP)ofTncellmembranewaspreliminarilyidentifiedasthecandidateproteininteractingw

6、ithenvelopeproteinGP64ofBV.Keyword：Autographacalifornicamulticapsidnucleopolyhedrovirus;Buddedvirus;GP64protein;Tnteractingprotein;Received：2017-04-25杆状病毒(baculovirus)是一类特异性感染无脊椎动物的有囊膜包裹的双链DMA病毒，其宿主以昆虫为主［1］。杆状病毒具有双相生活史，其子代病毒粒子呈现出2种结构和形态不同的表型，即出芽型病毒(buddedvirus,BV)和包涵体衍生型病毒(occlusion-derive

7、dvirus,0DV)。在病毒感染早期,病毒核衣壳在宿主细胞的细胞核内组装后从核膜出芽进入细胞质并最终从被病毒囊膜蛋白修饰过的细胞膜出芽获得囊膜，形成BV［2-3］。在感染晚期，核衣壳在细胞核内获得囊膜形成ODV,并在感染极晚期被包埋入多角体［2-3］°BV负责宿主内细胞与细胞之间的水平传播;ODV则是通过宿主昆虫摄入多角体在中肠内被释放并特异性感染屮肠上皮细胞的方式进行昆虫Z间的水平传播。通常，囊膜病毒入侵宿主细胞是以病毒囊膜糖蛋白与细胞表面的受体特异性结合为起始，受体决定了病毒的宿主域。因此，研究病毒受体的特性