wnt10b基因失活对人肝癌细胞增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭的影响

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1、：Ｒ７．２学校代码分类号３４：１０６０１密级：公开编号：Ｙ１２００１０１３？挂各屋聲资ＧＵＩＬＩＮＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕±学位论文ＷｎｔＷｂ基因失活对人肝癌细胞増殖、周期、调ｔ、迂移及侵袭的影响学科专业：病理学与病理生理学研究方向：讲瘦基因多态性研究生姓名：吴国慧学号：Ｙ１２００１０１３学位类型：科学学位导师姓名：孙莉教授二０－五年六月独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，也不包含

2、，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果未获得（巧；如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名；签字日期：部／ｒ年＾月５日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等刊（光盘版）电复制手

3、段保存、汇编学位论文。同时授权中国学术期、科学技术信研本论文收录到《中国优秀子杂志社中国息究所将学位，通过库》博硕±学位论文全文数据库》、《中国学位论文全文数据并提供信息服务。（学位论文在解密后适用本授网络向社会公众保密的权书）：签字：学位名论文作者签导师＇［【主期台之＾；兴月日签字日：瑚月日签字日年８期年目录Wnt10b基因失活对人肝癌细胞增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯2英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81.1实验材料与仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81.1.1细胞株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81.2主要实验试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81.2.1实验常用试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81.2.2常用溶液的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯101.3主要实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯121.4实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131.4.1人肝癌HepG2细胞空载体株control、稳定沉默shWnt10b#1和稳定沉默shWnt10b#2细胞的培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131.4.2WesternBlot检测control、shWnt10b#1和shWnt10b#2细胞中Wnt10b的蛋白表达水平⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯151.4.3CCK-8检测control、shWnt10b#1和shWnt10b#2细胞增殖情况⋯201.4.4平板克隆（集落）形成实验检测细胞克隆形成能

6、力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯211.4.5流式细胞术PI染色法检测细胞周期⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯211.4.6Hoechst33342染色检测细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231.4.7划痕愈合实验检测细胞迁移能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231.4.8Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯241.4.9统计与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262.1倒置荧光显微镜下拍照⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262.2特异性shRNA抑制Wnt10b蛋白的表达⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯272.3CCK-8法观察HepG2细胞增殖情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯282.4细胞平板克隆形成实验观察克隆形成能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292.5流式细胞术检测细胞周期⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯302.6Hoechst33342染色检测细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯312.7划痕愈合实验检测细胞的迁移能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯342.8Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯363讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯383.1Wnt10基因失活对肝癌细胞影响的研