klk8促进心肌细胞肥大的作用及其分子机制研究

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1、'—◆军医天署硕士学位论文KLK8促进心肌细胞肥大的作用及其分子机制研究Kallikrein·-relatedpeptidase8inducescardiomyocytehypertrophy研究生专业培养单位导师导师组成员赵威生理学基础部倪鑫教授朱晓燕副教授独创性声明愀本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签

2、名日期妒／毕年岁月矽名学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者日期钞f忤岁月7乙日导师签名：似日期汐仔年6月目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1ABSTI认CT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4缩写词汇ABBR

3、EVIATION⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9日lJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9材料与方法⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24一、KLK8在心脏中的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24二、KLK8在心肌肥大模型大鼠心脏组织中的表达变化⋯⋯⋯24三、心脏局部过表达KLK8促进心肌肥厚⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26四、KLK8促进心肌细胞肥大的作用及其机制⋯⋯⋯⋯⋯．．31讨论⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38结论⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯．40参考文献⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41综述⋯．．．．⋯．⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44在读期间发表论文⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．57致谢．．．．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．58KLK8促进心肌细胞肥大的作用及其分子机制研究摘要组织激肽释放酶(kallikrein，KLK)属于胰蛋白酶和糜蛋白酶样的丝氨酸蛋白酶类家族。目前关于KLK家族在心血管系统中的作用主要集中于KLKl的研究，已有结果表明KLKl具有保护心脏和抗心肌肥大的作用，而此保护作用主要是通过水解激肽原生成缓激肽等激肽类物

5、质，继而再作用于缓激肽B2受体(B2R)而完成。然而KLK家族的其他成员在心脏保护和肥大过程中的作用并不清楚。本实验室曹步清博士的研究曾发现在原代培养的乳鼠心肌细胞中，过表达KLK8可以通过促进激肽类物质的释放、继而作用于B2R从而减轻缺氧／复氧所导致的心肌细胞损伤。前期研究同时发现KLK8的过表达能够促进心肌细胞肥大，而且我们进一步研究发现过表达KLK8促进心肌细胞肥大的效应却并不能被激肽受体阻断剂所阻断，但是却能被蛋白酶阻断剂所阻断，提示KLK8促进心肌细胞肥大的作用依赖于其自身的丝氨酸蛋白酶活性，然而其具体机制仍未阐明。

6、作为丝氨酸蛋白酶，KLK8可以水解一系列蛋白底物而产生生物学效应。已有研究表明，KLK家族的底物除了激肽原外，还包括细胞外基质(ECM)成分、表皮生长因子(EGF)前体以及蛋白酶激活受体(PAR)等，其中关于EGF和PAR在心肌细胞中的作用均有文献报道，然而KLK8是否可能通过EGF和PAR依赖的途径促进心肌细胞肥大仍未可知，因此本课题首先明确了KLK8在正常大鼠心肌肥厚模型心脏组织中的表达变化，然后采用左心室前壁注射KLK8腺病毒表达载体的方法在整体水平证实KLK8是否具有促进心肌肥厚的作用，最终在原代培养的心肌细胞中又进一

7、步探讨KLK8是否通过EGF或PAR介导的机制促进心肌肥大。主要研究内容与结果如下：一KLK8在心脏中的表达首先我们使用免疫组化(IHC)的方法，证实在正常大鼠的心肌组织样本中确实有KLK8的表达。二KLK8在心肌肥大模型大鼠心脏组织中的表达变化己知自发性高血压大鼠(SHR)随着年龄的增加血压逐步升高，当达到16周龄的时已经发生明显的心肌肥厚。横向主动脉缩窄(TAC)大鼠在手术8周的时候也会发生明显的心肌肥厚。我们选择16周龄的SHR，以及TAC术后8周的这两个时间点的大鼠作为研究心脏肥大的整体模型。RealtimePCR结果

8、显示SHR和第二军医大学硕士学位论文TAC大鼠心肌组织中，心肌肥大标志物ANP和Myh7mRNA表达水平较之对照组显著增多。表明SHR和TAC大鼠心脏模型构建成功。通过对SHR和TAC大鼠的心肌样本检测发现。SHR大鼠心肌组织中KLK8的mRNA和蛋白表达较之对照WKY组均显