nulp1通过wnt信号通路调控p19细胞向心肌细胞分化的分子机制研究

《nulp1通过wnt信号通路调控p19细胞向心肌细胞分化的分子机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学校代码!Q5垒2学号2Q!!Q21垒12鱼塞Nulpl通过W_nt信号通路调控P19细胞向心肌细胞分化的分子机制研究StudiesonmolecularmechanisimofNulplincardiacdifferentionofP19cellsbyWntsignalingpathway研究生姓名指导教师姓名、职称学科专业研究方向湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一四年四月摘要IllIIMIIIIlUllllllnlllllllllUlY2548840心脏是胚胎发育过程中第一个由中胚层细胞发育形成的器官，并且它的发育包括多个步骤，从未成熟的中胚层细胞分化为心脏中

2、胚层细胞，再由心脏中胚层细胞发育为心肌细胞。因此研究心肌细胞分化具有十分重要的意义，它可以在治疗遗传因素导致的心脏病和其它心肌疾病中起到指导作用。碱性螺旋．环．螺旋(beisichelix．100p．helix，bHLH)蛋白，它是真核生物中的一种具有非常重要作用的转录因子，它们参与很多种生命活动，例如神经发育、肌细胞形成、心脏发育和血细胞形成以及癌症的发生，在这些生命活动中，bHLH蛋白发挥着无可替代的作用。人类舰勿j基因属于bHLH转录因子家族成员之一，是本实验室在筛选心脏发育相关基因过程中获得的。小鼠胚胎瘤细胞P19细胞是一种多功能干细胞，通过诱导试剂刺激可以分

3、化为跳动的心肌细胞：本研究构建-j"P19细胞心肌分化模型：用1．O％DMSO诱导P19细胞4天使其向心肌细胞分化，分化过程中细胞体积逐渐增大，形态多样化，梭形细胞增多，并最终出现了跳动的心肌细胞。westernblot检测心肌分化标志性基因出现了从无到有的表达，这些结果表日fjPl9细胞心肌分化模型的构建是成功的。同时检测至．IJNulpl在P19细胞心肌分化过程中表达表现出时空差异性，初步推测№勿J可能对P19细胞心肌分化具有抑制作用。本实验室之前的研究结果提示，Nulpl有可能通过抑制Wnt／13．catenin信号通路而抑制心肌分T化。通过westemblot

4、结果显示，在P19细胞系中，Nulpl的表达在第四天受到明显的抑制，这与本实验室之前利用RT-PCR技术分析获得的结果相一致。本研究迸一步利用DMSO对Nulpl的P19过表达系和干扰系进行诱导，通过westernblotJ羞行检测，结果表明，过表igVulpS时P19心肌细胞的分化与对照组相比受到了明显的抑制，而敲低地IplfN表达则促进P19心肌细胞的分化。将13．cetenin)喷粒转,3,,NuIpl过表达系中，通过免疫荧光实验检测MF20染色区域，我们发现13．catelliIl能够拯救NulpI过表达系的心肌分化程度。这些实验结果进一步证明-J"Nulpl

5、能通过抑制Wnt信号通路抑制P19细胞心肌分化。关键词：Nulpl基因；P19细胞；心肌分化IIABSTRACTTheheartisthefirstorgantobeformedfrommesodermalcellsduringembryogenesis，anditsdevelopmentalprocessconsistsofmultiplestepssuchascommitmentofimmaturemesodermalcellsintocardiacmesodermalcells，subsequentdifferentiationofcardiacmesoderm

6、alcellsintocardiomyocytes．Studyofmyocardialcelldifferentiationisofgreatsignificance，whichwillshedlightonthetherapeuticapproachesofcardiomyopathycausedbygeneticfactorsandothermyocardialdiseases．Thebeisichelix·-loop--helix(bHLH)proteinisadistincteukaryotictranscriptionfactorinvolvedinmany

7、importantphysiologicalprocesses，whichincludeneurogenesis，myogenesis，tumorgenesis，hemagenesisanddevelopmentprocess．HumanNulplproteinisamemberofthebHLH(basichelixloophelix)family．ThemouseembryoniccarcinomacellP19cellsareapluripotentstemcellswhichcandifferentiateintobeatingcardiom