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1、猪伪狂犬病病毒单克隆抗体制备及特征分析11,2111111*叶华虎，陈建宇，周小军，王进，代艳艳，韩宇，刘珩，袁菊芳1军事医学科学院实验动物中心北京1000712内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021摘要：目的制备伪狂犬病病毒（pseudorabiesvirus，PRV）单克隆抗体，为PVR防控奠定基础。方法以PRV疫苗毒株Bartha-k61免疫小鼠，取免疫小鼠脾脏B淋巴细胞与SP2/0进行融合，利用酶联免疫吸附实验（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELIS
2、A）筛选阳性杂交瘤细胞并制备腹水；再利用病毒中和实验检测单克隆抗体（腹水）对PRV的中和作用。结果通过细胞融合，共得到11株针对PRV的杂交瘤细胞。中和实验结果显示，无论是对于PRV弱毒株Bartha-k61还是强毒株AV25，2株杂交瘤细胞产生的腹水都表现为明显的中和效应；但两株单抗的中和能力不同，其中1株杂交瘤细胞腹水的中和效价为1:16~32，另1株的效价为1:4。交叉反应显示，11株单克隆抗体中，2株与单纯性疱疹病毒（herpessimplexvirus，HSV）存在明显的免疫反应，1株
3、与猴B病毒的gD蛋白存在明显交叉反应。结论成功制备了PRV的单克隆抗体，并获得了对PRV具有中和1作用的单克隆抗体，以及能与其他疱疹病毒交叉反应的单克隆抗体。关键词：伪狂犬病病毒；单克隆抗体；中和抗体；交叉反应Preparationandcharacterizationofmonoclonalantibodyagainstporcinepseudorabiesvirus11,211111YeHua-hu,ChenJian-yu,ZhouXiao-jun,WangJing,DaiYan-yan,L
4、iuHeng,YuanJu-fang1LaboratoryAnimalCenter,AcademyofMilitaryMedicalSciencesBeijing1000712CollegeofLifeSciences,InnerMongoliaUniversityHohhot010021Abstract:ObjectiveInordertocontroltheharmofpseudorabiesvirus(PRV),monoclonalantibodiesagainstPRVwereprodu
5、cedandanalysis.MethodsMicewereimmunizedwithPRVBartha-k61strainandthenitsspleenBlymphocyteswereseparatedandfusedwithSP2/0.Thepositivehybridomacellswerescreenedbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)andusedtoproduceascites.Theneutralizingeffectofmonoc
6、lonalantibodiesonPRVweredetectedbyvirusneutralizationexperiment.ResultsAtotalof11hybridomacellslineswereobtained,afterthetreatmentofcellfusionandscreening.Theresultsofvirusneutralizationtestshowedthattheascitesproducedbytwohybridoma作者介绍：叶华虎，男（1970~），
7、博士。主要从事实验动物病毒学研究。E-mail:huahuy512@126.com.*为通讯作者：袁菊芳，女，主要从事动物实验及新药研发。E-mail:yjf1014@tom.com.基金项目：国家自然科学基金项目（31272514，31501908），国家支撑计划课题（2015BAI08B03）celllinesblockedPRVattenuatedstrainbartha-K61andvirulentstrainAV25toinfectBHK-21cells.However,theabil
8、ityofneutralizationeffectwasdifferentintwomonoclonalantibodies.Formonoclonalantibodies5C9,theneutralizationtiterwas1:16~32andonly1:4wasinmonoclonalantibodies3C9.Inaddition,amongthe11monoclonalantibodies,2showedobviousimmunoreactionwithherpessimplexvi
