抗猪伪狂犬病病毒gH抗体的制备及gH在感染细胞中表达分析.pdf

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1、第33卷第5期中国预防兽医学报Vo1．33．No．52011年5月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineMav．20l1doi：10．3969／j．issn．1008—0589．2011．05．12抗猪伪狂犬病病毒gH抗体的制备及gH在感染细胞中表达分析刘庆伟1,2，邱亚峰，王晓杜，郭林，刘超，沈阳，李向东，单虎，马志永(1．中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生实验室，上海200241；2．青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109)摘要：为检测伪狂犬病病毒(PRV)在体外细胞中糖蛋白H(g

2、H)的表达情况，本研究构建原核表达重组质粒pET—gHN660，并在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白，纯化的gH重组蛋白免疫实验动物制备抗PRVgH抗体，经westernblot和IFA检测到病毒感染细胞中gH蛋白的表达，病毒感染细胞后表达的gH蛋白大小为95ku，定位于细胞浆中，gH蛋白在病毒感染细胞4h可以检出，随PRV的复制gH蛋白表达增加，gH蛋白可以作为PRV复制的指示蛋白。本研究利用制备的抗体分析感染细胞中gH蛋白的表达情况，初步探讨感染细胞中PRV的复制，为PRV和宿主相互作用的研究奠定基础。关键词：伪狂犬病病毒；gH基因；抗PRVgH抗体

3、中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2011)05—0383—05Preparationofantibodiesagainstpseudorabiesvirus(PRV)gHanddetectionofgHinPRVinfectedcellLIUQing—wei，QIUYa—feng，WANGXiao—du。，GUOLin，L1UChao，SHENYang，LIXiang—dong，SHANHu，MAZhi—yong(1．DepartmentofVeterinaryPublicHealth，ShanghaiVete

4、rinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Shanghai200241，China；2．CollegeofAnimalScienceandTechnology，QingdaoAgricuturalUniversity，Qingdao266109，China)Abstract：ToanalysistheexpressionofglycoproteinH(gH)inpseudorabiesvirus(PRV)infectedcell，partialdomainofPRVgH

5、wasexpressedinE．coliandpurifiedtopreparetheanti—PRVgHantibodiesinrabbit．gHproteinexpressedinPRVinfectedcellweredetectedbywesternblotandimmunofluorescence．TheresultsshowedthatthemolecularweightofPRVgHwas95kuandexpressedat4hourspostinfection，mainlylocatedinthecytoplasm，andaccumu

6、latedasPRVreplication，PRVgHwouldbeapotentialindicatorproteinofPRVreplicationininfectedcells．TheexpressionofPRVgHwereanalysisedusinganti—PRVgHantibodies，andthePRVreplicationwasdiscussed．Keywords：pseudorabiesvirus；gHgene；anti—PRVgHantibodies伪狂犬病(Pseudorabies)是由伪狂犬病病毒(Pseu—毒亚科，其基

7、因组为线性双股DNA分子，全长约dorabiesvirus，PRV)感染猪和其它动物引起的重要150kb，编码70种～100种蛋白，其中糖蛋白gH传染性疾病，自1902年发现以来呈世界性流行，给作为病毒复制的必需蛋白，在病毒侵入靶细胞及病养猪业带来经济损失，成为仅次于口蹄疫和猪瘟的毒在细胞间的扩散过程中发挥重要作用。研究表主要疫病之一[I_2]。PRV属于疱疹病毒科．疱疹病明，gH蛋白为I型膜蛋白，其原始翻译产物由686*Correspondingauthor收稿日期：2010．09．20基金项目：国家自然科学基金青年基金(30700593)；中央

8、级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目作者简介：刘庆伟(1982一)，男，山东济宁人，硕士研究生，主要从事病毒与宿主相