血清抗htert自身抗体作为癌症诊断标志物的初步研究

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1、《中国图书资料分类法》单位代码：10660分类号：R446.1学号：S090092贵阳医学院2012届硕士学位论文血清抗hTERT自身抗体作为癌症诊断标志物的初步研究研究生：周爱群导师：刘杰麟教授年级：2009级专业：临床检验诊断学2012年5月20日目录摘要.........................................................................................................1前言..................

2、.......................................................................................3材料与方法................................................................................................5结果................................................................

3、.......................................27讨论.......................................................................................................42参考文献...................................................................................................48英文摘

4、要...................................................................................................50致谢.......................................................................................................52略缩词表...........................................

5、........................................................53论文独创性声明......................................................................................55附：综述...................................................................................................

6、56贵阳医学院2012届硕士研究生论文血清抗hTERT自身抗体作为癌症诊断标志物的初步研究专业：临床检验诊断学研究生：周爱群导师：刘杰麟教授摘要：目的：通过构建人端粒酶逆转录酶中段（hTERT-m）、C-端（hTERT-c）蛋白原核表达系统，并分离提纯获得高纯度的hTERT-m和hTERT-c蛋白，以此两种蛋白为抗原利用间接ELISA技术检测癌症患者血清抗hTERT自身抗体水平，为血清抗hTERT自身抗体能否作为一项新的肿瘤标志物提供实验依据。方法：1.质粒载体pMAL-c5X和重组质粒pMAL-p5X-h

7、TERT-m、pMAL-p5X-hTERT-c经限制性内切酶BamHⅠ和NdeⅠ双酶切，琼脂糖凝胶电泳分离后，割胶回收获得带有相同粘性末端的质粒载体和目的基因，T4DNA连接酶16℃连接过夜；2.连接产物转化克隆菌株NEB10-β大肠杆菌感受态细胞，提取重组质粒进行酶切及测序验证；3.重组质粒pMAL-c5X-hTERT-m、pMAL-c5X-hTERT-c转化表达菌株TB1大肠杆菌感受态细胞，挑取单个菌落进行小培养，0.3mmol/LIPTG诱导目的蛋白表达，经12%SDS-PAGE初步验证目的蛋白是否表

8、达；4.重组表达菌TB1扩大培养，0.3mmol/LIPTG诱导目的蛋白表达，运用直链淀粉树脂层析柱和BioLogicDuoFlow蛋白纯化仪分离提纯目的蛋白，经SDS-PAGE、Westernblot鉴定、考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质浓度。5.利用间接ELISA法检测135例癌症患者、96例良性疾病患者及135例正常对照组血清抗hTERT-m和抗hTERT-c自身抗体的水平，检测结果进行统计分析。结果：①成功