高产油脂菌株选育及其油脂提取工艺研究

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1、河南科技大学硕士学位论文高产油脂菌株选育及其油脂提取工艺研究姓名：王敏申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：李市场20091201摘要论文题目：高产油脂菌株选育及其油脂提取工艺研究专业：生物化学与分子生物学研究生：王敏指导教师：李市场摘要油脂既是构成和维持生命活动的基本物质之一，也是重要的工业原料，具有广泛的应用价值。目前油脂资源主要来源于动植物，随着人们对微生物油脂研究的不断深入，利用微生物发酵法获得油脂，不但可以缓解动植物油脂资源紧缺的局面，而且产油微生物可以进行废弃物的资源化再利用，为油脂资源的获得提供了一条新的途

2、径。本论文以粘红酵母(Rhodotorulaglutinis)31596为研究对象，从培养基优化、高产菌株的诱变、油脂提取工艺优化等三个方面选育高产油脂菌株。主要研究工作如下：1．基础产脂培养基的优化在温度28℃，初始pH5.8，接种量5%，250mL摇瓶娤液量40mL的培养条件下，确定粘红酵母(Rhodotorulaglutinis)31596摇瓶发酵的最佳发酵培养基成分(g/L)：葡萄糖80，硫酸铵1.11，磷酸二氢钾2.5，蛋白胨1.8；其生物量和油脂量分别达到了18.18±3.34g/L和32.06±1.91mg/g。2．高产油

3、脂菌株的诱变选育为了进一步提高其菌体生物量和菌体油脂量，以粘红酵母(Rhodotorulaglutinis)31596为出发菌株，对其进行低能离子注入诱变和紫外诱变，经过初筛、复筛，获得一株油脂高产菌株VB19。该突变菌株摇瓶培养96h，生物量达21.63±1.14g/L，油脂量达42±1.78mg/g，分别比出发菌株提高19%和31%，连续传代多次，其产量性状无显著变化。3．粘红酵母油脂提取工艺的优化通过研究酸热法、超声波法和酸热耦合超声波法对粘红酵母Rhodotorulaglutinis微生物油脂提取的影响，结果显示酸热耦合超声波法

4、效果最好。在酸热耦合超声波法提取油脂的过程中，通过Plackett-Burmen试验设计，以P<0.05为准，筛选出酸处理时间(P=0.0360)、超声处理时间(P=0.0105)、提取液配比(VCHCl3︰VCH3OH)(P=0.0105)三个对粘红酵母Rhodotorulaglutinis油脂提取具有显著影响的因素。在此基础上，通过Box-Behnken试验设计，对酸处理时间、超声处理时I河南科技大学硕士学位论文间、提取液配比(VCHCl3︰VCH3OH)三个显著因子进行响应面优化，得到最佳工艺参数为酸处理时间34min，超声时间7

5、.5min，提取液配比(VCHCl3︰VCH3OH)1.9︰1。与原始工艺相比，湿菌油脂重量从42.67±1.43mg/g提高到57.33±2.4mg/g，提高了36.5%。关键词：粘红酵母，微生物油脂，诱变选育，工艺优化论文类型：应用基础研究II摘要Subject:StudyonOilHigh-yieldStrainsandTecnichsofExtractingMicrobialOilSpecialty:BiochemistryandMolecularBiologyName:WangMinSupervisor:LishichangA

6、BSTRACTOilwhichhasawiderangeofapplicationsisoneofprimarysubstancethatcanmakeupandsustainlifeactivity,andisimportantindustrialrawmaterials.Currently,oilsourceismainlyfromanimalsandplants.Asmicrobialoilwasstudiedbypeople,utilizationofmicrobialfermentationwasusedtoobtainoil

7、s,whichnotonlycanalleviatethesituationofscarceresourcesofanimalandplantoils,butalsocanreusewasteresourcebyoil-producingstrains.Thatprovidesanewwayforaccesstooilresources.TakingRhodotorulaglutinis31596astheresearchobjectinthispaper,high-yieldingstrainsofoilwereobtainedbyt

8、hreemeans,suchasmediumoptimization,bacterialmutationandoptimizationofoilextraction.Majorresearcheswerea