戈谢病gba基因突变分析

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1、AⅡ1esissubmittedtoZhengzhouUniVersityformedegreeofMasterMutationalanalysisofGBAinGaucherDiseaseBy：Zhell)【iaoLiSupervisor：ProfQiangLuoPedia由ricsTheFirstAmliatedHospitalofZhengzhouUniversi够March2014原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要

2、贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：东瓤日期：2辨年箩月芍日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：

3、夺振晚日期：琳年s月巧日摘要戈谢病GBA基因突变分析研究背景戈谢病是一种常染色体隐性遗传引起的溶酶体贮积病。由于葡糖脑苷脂酶GBA基因突变，葡糖脑苷脂酶活性降低或丧失，造成葡糖脑苷脂在巨噬细胞内贮积，临床上以肝脾肿大、贫血、血小板减少、骨骼破坏、生长发育落后、反复癫痫发作和共济失调为主。戈谢病预后不良，给病人及其家庭带来很大痛苦，也给社会增加了沉重负担。总结其临床表现和骨髓穿刺结果，对疾病进行早期诊断。同时为了减少该类遗传病的发生，基因诊断和遗传咨询工作渐提上日程。目的现总结我院住院2个家系中2名戈谢病患儿的临床表现及骨髓穿刺结果，通过基因测序研究分析其基因突变类型，为这2个家系提供

4、产前诊断及遗传咨询。方法征得家属知情同意后，该实验收集了2个无关的戈谢病家系的临床资料和外周血样，同时收集了10名『F常儿童的外周血样，以排除基因多态性。利用1m1血液基因组EINA提取试剂盒提取2名患者及其家属的外周血基因组DNA。根据人类基因组数据库中获取的GBA基因序列设计引物，采用聚合酶链反应(Polymer髂eChainReauction器PCR)技术进行体外扩增，应用PeR产物回收试剂盒进行PcR产物回收、纯化，采用DNA直接测序的方法对GBA基因的外显子及侧翼序列测序，将测序结果与G础a11l(中的序列进行对比分析，查找基因突变位点及其类型，对发现突变的采用1A克隆技术

5、进一步验证。摘要结果1．PcR扩增片段与预计扩增片段长度一致，无非特异扩增片段，可进行纯化和测序；，2．家系1中先证者GBA基因第6外显子发生4种突变，N188s(c．680A>G)杂合突变，N188K(c．681T>G)杂合突变，V19lG(c．689T>G)杂合突变，S196P(c．703T>c)杂合突变，先证者父母及姐姐第6外显子上诉4种突变也以杂合形式存在；3．家系2中先证者及其父母GBA基因第6外显子也发生上诉4种突变，同时先证者第9外显子发现缺失突变c．12631317del55和D409H(c．1342G>c)纯合突变，而先证者父母第9外显子未发现异常。结论1．2个家系

6、中的先证者临床表现及骨髓穿刺结果符合戈谢病的诊断标准，诊断明确；2．家系1和家系2中发现的4种突变N188S(c．680A>G)，N188K(c．68lT>G)，V19lG(c．689T>G)，S196P(c．703T>C)，考虑为GBA基因与GBA假基因所致，若要进行进一步鉴别，需进一步对GBA基因第6外显子重新设计引物并对家系l和家系2第6外显子进行测序；3．家系2中发现c．12631317del55和D409H(c．1342G>C)纯合突变为先证者的分子遗传学基础，考虑为散发病例，患儿父母未发现基因突变，考虑患儿这些突变不是来源于其父母；4．本研究从分子水平揭示了部分戈谢病的分

7、子遗传学基础，丰富了国内在戈谢病分子遗传学领域的研究，在方法学上为该病的分子遗传学研究提供了可行途径。关键词：戈谢病，GBA基因，突变IIMutationalAnalysisofGBAinGaucherDiseaseBac蚝r01mdAbstractGaucherdise嬲e(GD)isaIlantosomalrecessiVelysosomalstoragediseaSe．BecauseofGBAgenemutation，烈ucocerebrosidas