水泡性口炎病毒新型突变株的构建及毒性的研究

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1、ZSTUZhejiangSci-TechUniversity硕士学位论文Master’sThesis中文论文题目:水泡性口炎病毒新型突变株的构建及毒性的研究英文论文题目：Constructionandevaluationofnovelrecombinantvesicularstomatitisvirusinanimals学科专业：生物学作者姓名：齐兵指导教师：吴祥甫研究员孙涛副研究员完成日期：2014年12月29日万方数据万方数据万方数据本课题由国家自然科学基金面上项目：水泡性口炎病毒基质蛋白（M）对猪天然免疫应答的抑制

2、作用研究（No.31272562）提供资助万方数据浙江理工大学硕士学位论文水泡性口炎病毒新型突变株的构建及毒性的研究摘要弱毒疫苗和灭活疫苗是目前人和动物传染病预防的两种最主要方式。利用弱化的活病毒作为载体表达外源抗原，可高效而全面地激发机体免疫应答，是有前途的疫苗研制方式。水泡性口炎病毒（VSV）是一种良好的病毒载体，动物体内的研究表明，表达外源蛋白的重组VSV病毒可有效激发机体体液免疫和细胞免疫，提供较全面和持久的保护。然而，目前制约VSV载体进入实际应用的一个关键问题是其安全性，试验表明，在高剂量接种VSV后，小鼠可

3、表现出神经毒性，出现诸如后肢麻痹等症状，因此，野生型的VSV疫苗载体仍然需要进一步地改造，以提高其使用的安全性。M蛋白作为VSV的重要毒力因子，与VSV的致病性形成密切相关，有研究表明：自然情况下，存在一种VSV突变体，其M蛋白上第51位氨基酸（甲硫氨酸）突变为精氨酸，这种突变型VSV的致病性减低。目前研究的一个不足是，对VSV致病机理及M蛋白在其中意义的研究数据几乎完全来源于小鼠。猪是VSV的天然宿主之一，本试验研究了M蛋白第51位氨基酸发生缺失的重组水泡性口炎病毒（VSVΔM51）对猪的致病性和免疫原性。结果表明，相

4、比野生型VSV，接种VSVΔM51后动物临床症状明显减轻；抗体中和的检测显示，VSVΔM51可有效地激发本体动物的免疫应答，有希望成为一个有效的预防猪VSV的候选疫苗载体。由于VSVΔM51仍然具有一定毒性，利用重组DNA技术，本试验又构建了M蛋白三位点发生突变的新型重组VSV病毒（VSV-MT），突变的位点包括：M蛋白第51，221位和226位氨基酸。在此基础上，本试验对新病毒进行了体外和体内生物学特性的鉴定，包括体外病毒多步生长曲线，病毒在动物体内的致病性和免疫原性等。体外病毒多步生长曲线结果表明，VSV-MT的增殖

5、能力显著弱于野生型VSV病毒（VSVXN2）。体内实验中，以体重变化和组织病毒载量等为指标，较之野生型VSV病毒和VSVΔM51病毒，VSV-MT显著弱化。病毒在毒性弱化后，通常会出现免疫原性的减弱，因此，本试验对弱化的VSV-MT的接种动物的免疫保护力进行了测定。VSV-MT在小鼠中进行的实验表明，不同剂量的VSV-MT接种动物后，动物体内可产生较高水平的中和抗体，免疫动物21d后，对各免疫剂量组的动物用野生强毒攻击，动物未出现死亡、显著的体重下降等症状。关键词：水泡性口炎病毒、病毒载体、基质蛋白、致病性、免疫原性I万

6、方数据浙江理工大学硕士学位论文水泡性口炎病毒新型突变株的构建及毒性的研究AbstractPresently,attenuatedandinactivatedpathogensarecommonlyappliedfordevelopingvaccines.Manyattenuatedviruseshasbeenusedtoexpressforeignantigenswhichcanstimulateefficientandcomprehensiveimmunueresponsesinvivo,andcanbeapromis

7、ingmethodforvaccinedevelopment.Vesicularstomatitisvirus(VSV)isanexcellentviralvector.InvivostudiesindicatedthatrecombinantVSVcanstimulatebothhumoralimmunityandcellularimmunity,whichinducecomprehensiveandLastingprotectionforanimals.However,therestillexisttoxicitie

8、swithrecombinantVSVsinanimals.InoculatedwithhighdosesofVSV,neurotoxicityincludinghindLimgparalysisappearedinBALB/cmice.Therefore,VSVstillneedtobeattenuatedduet