结直肠癌duffy抗原趋化因子受体的表达及单核苷酸多态性的研究

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1、中图分类号密级结直肠癌Duffy抗原趋化因子受体的表达及单核苷酸多态性的研究SingleNucleotidePolymorphismsandExpressionofDuffyAntigenReceptorforChemokinesinColorectalCancer计：学位论文：115页表格：23个插图：14幅周世航指导教师：朴丰源教授申请学位级别：博士学位学科(专业)：生物化学与分子生物学培养单位：大连医科大学完成时间：二。一四年五月答辩委员会主席：独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在指导教师指导下进行的研究工作及所取得的研究成果。除了文中特别加以

2、标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：憾签字日期：皂堕年—Uj￡日、．P关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定。同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论

3、文属于(请在以下相应方框内打“√”)：1-保密口，在—-年解密后适用本授权书。2．不保密口。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12第一部分结直肠癌Du丘’y抗原趋化因子受体的表达与微血管密度的相关性(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、231．材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231．1患者和组织样本⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231．2实验仪器及设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231．3试剂⋯⋯⋯⋯。⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．242．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252．1组织RNA提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．252．2RNA浓度和纯度检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252．3RNA质量检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252．4基因组DNA的除去反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．262．5反转录反应⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262．6SYBRGreenRealTimePCR反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262．7DARC、CD34和MMP．9免疫组织化学染色⋯⋯⋯⋯282．8免疫组织化学染色结果判断⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．9统计分析⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一30(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一301．结直肠癌和正常结直肠组织中DARC蛋白和mRNA的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．302．结直肠癌DARC蛋白表达和病理特征的相关性⋯⋯⋯323．结直肠癌和正常结直肠组织中MMP．9的表达⋯⋯⋯．

6、．324．结直肠癌MMP．9表达和病理特征的相关性⋯⋯⋯⋯．．335．结直肠癌MVD和病理特征的相关性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．336．结直肠癌DARC蛋白表达、MVD以及MMP．9表达相关性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一33(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．42(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一43第二部分Dully抗原趋化因子受体TaqMan．MGB探针实时PCR基因分型方法的建立及人群基因频率调查(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯．．491．材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．491．1血液样本⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．491．2实验仪器及设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．491．3试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．502．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．512．1血液基因组DNA的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一512．2DNA浓度和纯度检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯522．3引物和探针的设计与合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．522．4PCR-ASP⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．522．

8、5TaqMan-MGB探