晚期nsclc患者血浆egfr和kras基因突变检测及临床意义分析

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1、第三军医大学硕士学位论文晚期NSCLC患者血浆EGFR和KRAS基因突变检测及临床意义分析姓名：孙洁申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：陈正堂201205第三军医大学硕士学位论文晚期NSCLC患者血浆EGFR和KRAS基因突变检测及临床意义分析摘要目的：应用焦磷酸测序法检测晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆和肿瘤组织中EGFR和KRAS基因突变状况，分析血浆样木是否可作为肿瘤组织的良好替代；研究NSCLC患者血浆EGFR和KRAS基因突变与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR—TKI)治疗疗效的关系；分析NSCLC患者血浆EGFR和K

2、RAS基因突变与临床预后的关系。方法：收集晚期NSCLC患者的外周血样本146例、组织样本64例，其中血浆与组织配对者共40例。采用巢式PCR法扩增KRAS基因第2外显子，酶切富集PCR(ME—PCR)扩增血浆EGFR基因的19、20和21外显子，对PCR产物进行焦磷酸测序。并进行Kaplan—Meier生存分析。结果：1．64例晚期NSCLC肿瘤组织中检测到EGFR基因突变22例，突变率为34．38％；KRAS基因突变3例，突变率为4．69％。2．对99例晚期NSCLC血浆样本进行了EGFR基因检测，发现EGFR基因突变24例，突变率为24．24

3、％(24／99)，与组织样本EGFR基因突变率相比，无统计学差异(P=-0．16)。对全部146例晚期NSCLC血浆样本进行了KRAS基因检测，发现KRAS基因突变9例，突变率为6．16％(9／146)，与组织样本KRAS基因突变率相比，无统计学差异(P=-0．919)。3．对40例血浆和组织配对样本进行基因检测，发现组织EGFR突变15例，血浆EGFR突变13例，其中11例突变在组织和血浆中同时检测到，两种样本EGFR基因检测的一致性为85．O％(34／40)。以组织基因检测为金标准，血浆EGFR突变检测的灵敏度为73．33％(11／15)，特异

4、度为92％(23／25)。在40例组织中检测到KRAS突变1例，配对的血浆中未检测到KRAS突变。血浆和组织中KRAS基因突变检测一致性为97．5％(39／40)。4．晚期NSCLC肿瘤组织和血浆中EGFR突变与临床病理特征的关系：晚期NSCLC患者组织中的EGFR突变与吸烟史、肿瘤类型间有显著统计学意义。非吸烟第三军医大学硕士学位论文患者EGFR突变率明显高于吸烟患者(P=-0．013)，腺癌中EGFR突变率明显高于非腺癌(P=0．022)。女性患者的EGFR突变率(47．83％)高于男性(26．839％)，统计学差异不甚明显(仁O．09)。但组

5、织EGFR突变率与年龄(P=-0．913)、PS评分(P=-0．702)、临床分期(P=-0．164)间均无统计学意义。晚期NSCLC患者血浆中EGFR基因突变与年龄、性别、肿瘤类型、分期、吸烟史、Ps评分的相关性分析中均未发现显著统计学差异(P>0．05)。5．晚期NSCLC肿瘤组织和血浆中KRAS检测与临床病理特征的关系：晚期NSCLC患者肿瘤组织和血浆中KRAS基因突变与年龄、性别、肿瘤类型、分期、吸烟史、PS评分的相关性分析中均未发现显著统计学差异(P>0．05)。6．接受TKI治疗的患者共有38例，血浆EGFR突变者的疾病控制率(DCR)

6、和客观缓解率(ORR)分别为90％(9／10)和60％(6／10)，EGFR野生型患者的DCR和ORR分别为(53．57％，15／28)和(17．86％，5／28)。血浆EGFR基因是否突变，与TKI治疗疗效有关(DCR，P=0．059：ORR，P=0．019)。7．接受TKI治疗的患者中，血浆KRAS野生型患者的DCR和ORR(66．67％，22／33；33．33％，11／33)高于KRAS突变患者(40％，2／5；O％，0／5)。但统计学差异不明显(DCR，P=0．337；ORR，P=-0．295)。8．接受TKI治疗的患者，总体中位PFS为6

7、个月，EGFR基因19和21外显子突变的患者中位PFS为10．5个月，较EGFR野生型患者的中位PFS(5．1个月)显著延长，但统计学意义不明显(P--0．228)。KRAS突变的患者病情进展较快，其中位PFS仅为2．5个月，明显小于KRAS野生型患者的PFS(9个月)，两组患者PFS具有显著统计学差异(P=-0)。结论：1、晚期NSCLC血浆和组织中EGFR和KRAS基因突变具有高度的一致性，血浆样本可以作为组织样本的良好替代。2、焦磷酸测序技术具有操作简便、高通量检测的特点，与ME．PCR的结合可有效富集突变型EGFR基因，可以准确检测出血浆E

8、GFR和KRAS基因突变，可用于筛选适合TKI治疗的NSCLC患者，有利于指导NSCLC患者的个体化用药。3、晚期NSCL