HRM法检测结直肠癌患者循环DNA中KRAS和EGFR基因突变.pdf

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1、临床检验杂志2013年7月第31卷第7期ChinJClinLabSci，Ju1．2013，Vo1．31，No．7·535··研究生园地·文章编号：1001-764X(2013)07-535-03HRM法检测结直肠癌患者循环DNA中KRAS和EGFR基因突变曾俊萍，尹苹，徐克前(中南大学湘雅医学院医学检验系，长沙410013)摘要：目的探讨高分辨率熔解曲线(HRM)法检测结直肠癌患者循环DNA中KRAS和EGFR基因突变的可行性。方法用HRM法检测70例结直肠癌患者KRAS基因2号和3号外显子以及EGFR基因19和21号外显子的突变情况，用直接测序法验证结果的准确性。结果70例结直肠癌患者血液

2、标本经HRM法、直接测序法分别检测到18例(25．7％)和17例(24．3％)KRAS基因2号外显子突变；均检测到3例EGFR基因19号外显子突变(4．3％)；两法均未检测到3号外显子和21号外显子突变。HRM检测与直接测序法结果符合率为99．6％(279／280)。结论HRM法检测结直肠癌患者血样本KRAS和EGFR基因突变，具有准确度高、操作简单、检测成本低等优点，适合在临床推广应用。关键词：高分辨率熔解曲线；KRAS；EGFR；结直肠癌中图分类号：R735．3文献标志码：ADeterminationofKRASandEGFRmutationsincolorectalcancerpati

3、entsbyhighresolutionmeltinganalysisZENGJun-ping，Y1NP，XUKe—qian(DepartmentofMedicalLaboratory，XiangyaSchoolofMedicine，CentralSouthUniversity，Changsha410013，Hunan，China)Abstract：ObjectiveToevaluatethefeasibilityofdetectingKRASandEGFRmutationsinthepatientswithcolorectalcancerbyhighresolutionmelting(HR

4、M)analysis．MethodsThemutationsofKRAS—EXON2，KRAS—EXON3，EGFR—EXON19andEGFR-EXON21in70patientswithcolorectalcancerweredetectedbyHRManalysisanddirectsequencing．ResultsKRAS·EXON2mutationsweredetectedin18patients(25．7％，18／70)byHRManalysisand17patients(24．3％，17／70)bydirectsequencing．EGFR—EXON19mutationswe

5、redetectedin3patients(4．3％，3／70)bytwomethods．BothKRAS—EXON3andEGFR—EXON21mutationswerenotde—tectedbytwomethods．Thecoincidenceratebetweenthetwomethodswas99．6％(279／280)．ConclusionComparedwiththedi—rectsequencing，HRManalysisfordetectingKRASandEGFRmutationsinthepatientswithcolorectalcancerwasanaccurate

6、，eonvenientandeconomicalmethodforclinicalapplication．Keywords：highresolutionmehingcurve；KRAS；EGFR；colorectalcancer结直肠癌(colorectalcancer，CRC)的发病率居1．1一般资料2012年9月至2012年12月在中全球恶性肿瘤的第三位¨J。研究4。发现，KRAS和南大学湘雅医院和湖南省肿瘤医院经病理组织学确EGFR基因突变在CRC的发生、发展中具有重要作诊为CRC患者7O例，均符合2010年我国卫生部制用，并与其治疗效果密切相关。因此，建立一种简定的《结直肠癌诊疗规范

7、》中的诊断标准。男44便、高效的检测KRAS和EGFR基因突变方法，对临例，女26例，年龄23～76岁。所有患者术前均未经床CRC研究具有重要意义。高分辨率熔解曲线化疗、放疗及分子靶向治疗。以直接测序为KRAS、(highresolutionmelting，HRM)分析法是一种遗传突EGFR基因野生型的标本做野生型标准品。变扫描及基因分型新方法，具有操作简单快捷、特异1．2标本采集收集CRC患者空腹静脉血5m