苦瓜枯萎病菌的鉴定、遗传多样性及其与寄主互作差异蛋白研究

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1、万方数据UDC+学号Q窆兰l垒Q2QQ垒密级盆盈商犬位论文苦瓜枯萎病菌的鉴定、遗传多样性及其与寄主互作差异蛋白研究陈振东专业名称植物病理学学院名称农学院指导教师黎起秦教授申请学位级别博士论文提交日期2014年10月10日论文答辩日期2014年11月25日学位授予日期答辩委员会主席蕴达苤!l丝论文评阅人盔鲨论文评阅人—盏二哞．_—一万方数据广西大学学位论文原创性和使用授权声明IfUllIMJIIIf[1111IIIllIIIIIIllJIllllIIIIlUlY2888245本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取

2、得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存

3、、汇编学位论文。本学位论文属于：口保密，在年解密后适用授权。／虾保密。(请在以上相应方框内打“√")论文作者签名：指导教师签名：作者联系电话：诱砺知名易奈日期：2014年，2月≯p日日期：2014年胆月2D日电子邮箱：czd3808@gxaas,net万方数据苦瓜枯萎病菌的鉴定、遗传多样性及其与寄主互作差异蛋白研究摘要苦瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌苦瓜专化型(FusariumoxysporumSchl．￡sp．momordicaeSun&Huang)侵染引起的一种植物土传病害，遍及中国、菲律宾、日本以及印度等亚洲国家的苦瓜主产区，严重制

4、约了当地苦瓜产业发展。本研究对尖孢镰刀菌苦瓜专化型病原菌的鉴定、分子检测、遗传多样性、种质资源抗性的苗期鉴定以及病原菌与寄主互作的差异蛋白质分析等方面进行研究，获主要结果如下：1、2009～2010年从我国6个省份采集苦瓜枯萎病标样分离的菌株，根据病菌形态特征、致病性和rDNA．ITS序列测定的结果，将48株菌株鉴定为尖孢镰刀菌苦瓜专化型。不同菌株对苦瓜幼苗的致病力存在差异，菌株的致病力强弱与菌落产生的色素无关。测试的菌株除侵染苦瓜的幼苗外，还可以侵染蒲瓜、园扁葫芦和长颈葫芦等瓠瓜变种的幼苗，但不侵染瓠瓜变种细腰葫芦及其他瓜类的幼

5、苗。在rDNA．ITS序列聚类树中，48株自测的苦瓜枯萎病菌株与来自GenBank数据库中的13株尖孢镰刀菌菌株聚成一群，与其他镰刀菌菌株分在不同进化枝上，但rDNA．ITS序列不能把尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌株与种内的其他专化型菌株区分成不同类群。2．用320条随机引物对不同地理来源的24株瓜类枯萎病菌的基因组DNA进行RAPD．PCR扩增和图谱特征分析，获得大小为519bp的尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌株特异的片段$58-519，经回收纯化和克隆测序，设计出一对特异引物FURl，成功将目标RAPD标记转换成SCAR标记RS．256。验证

6、实验结果表明，该标记表现出稳定的特异性和专一性，设计的特异引物可以直接用来鉴别尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌株，不需要进行寄主回接试验。建立了尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌株的SCAR．PCR检测体系，该体系能检测到浓度为1pg·pL。的病原菌基因组DNA、土壤中100个病原孢子·g。1和已感病但未显症的苦瓜植株组织中的苦瓜枯萎病菌。3、用18条RAPD标记多态性随机引物分析48株尖孢镰刀菌瓜类专化型菌株的遗传多样性，标记出的DNA条带多态性检测率平均为97．81％，平均每个引物产生万方数据14．5条多态性条带；在尖孢镰刀菌瓜类专化型菌株的RAP

7、D分析聚类树状图中，所有苦瓜枯萎病菌株聚在一个分支上(Gl群)，菌株间的遗传相似系数范围为0．92～1．00，具有较高的遗传相似性，且菌株的聚群与地理来源存在一定的相关性。用7对AFLP标记多态性丰富的EcoRI．MseI选择性扩增引物分析48株不同地理来源的尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌株的遗传多样性，扩增位点的多态率平均为99．14％，单对引物扩增的多态位点平均为51．86个；在尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌株的AFLP分析聚类树状图中，菌株聚群与菌株致病力存在一定相关性，其中高毒力菌株聚在AGl群，遗传相似系数为0．91--O．99，其他相

8、对低毒力的菌株分别聚在11个分支上，遗传差异显著；高毒力菌株的聚群与菌株的地理来源高度相关；利用PopGene软件分析6个苦瓜枯萎病菌地理居群问的遗传分化程度，发现居群间的相似程度较低，遗传距离较大，菌株的遗传分化主要发生在居群间，菌株居群间的基因