分泌型卷曲相关蛋白1和慢性牙周炎相关研究

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1、分泌型卷曲相关蛋白1和慢性牙周炎相关研究［摘要］目的检测分泌型卷曲相关蛋白l(SFRPl)在慢性牙周炎(CP)患者和牙周健康者的表达情况，探讨SFRP1在CP的发生与发展过程中的作用。方法选择CP患者28例为试验组，按临床附着丧失(CAL)程度分为轻、中、重度3组，另外选择牙周健康者10例为对照组。收集两组研究对象的龈沟液，采用酶联免疫吸附法测定龈沟液中SFRP1的质量浓度。取试验组中22例CP患者的病变牙龈组织标本，以及10例对照组的正常牙龈组织，进行SFRP1免疫组织化学染色，观察着色强度，分析SFRP1表达与不同程度CP的相关性。结果1)试验

2、组和对照组龈沟液中SFRP1的质量浓度分别为(281.07+33.37)和(245.30+35.69)ng・L-l,试验组明显高于对照组(P0.05)o结论SFRP1在CP患者龈沟液及牙龈组织中的表达高于牙周健康者，SFRP1可能参与了CP的发生发展过程。［关键词］慢性牙周炎；龈沟液；分泌型卷曲相关蛋白1［中图分类号］R783.5［文献标志码］A［doi］10.7518/hxkq.2013.06.017分泌型卷曲相关蛋白1(secretedfrizzled-relatedprotein1,SFRP1）是一种分泌型糖蛋白，是Wnt信号通路的重要拮抗剂

3、。Wnt信号通路能影响人牙周膜成纤维细胞（periodontalligamentcells,PDLCs）的成骨分化调节骨生成和改建[1-2],由此推测，SFRP1与慢性牙周炎（chronicperiodontitis,CP）可能存在密切关系。本研究通过检测CP患者龈沟液中SFRP1的水平及病变牙龈组织中SFRP1的表达，探讨SFRP1在CP发生中的作用。1材料和方法1.1主要材料与研究对象SFRP1酶联免疫分析试剂盒（R&D公司，美国），SFRP1兔抗人、鼠多克隆抗体（Abeam公司，美国），通用型Streptavidin-HRP试剂盒、免疫组织化

4、学DAB显色剂（北京康为世纪生物科技有限公司）。实验对象均取自2011年3—12月在中南大学湘雅医院口腔科就诊的患者，选择CP患者28例为试验组，牙周健康者10例为对照组。CP患者按照临床附着丧失（clinicalattachmentloss,CAL）分为3度：轻度CP患者9例，CAL为1〜2mm；中度CP患者10例，CAL为3〜4mm；重度CP患者9例，CAL25mm。试验组与对照组年龄、性别均匹配。所有研究对象均了解本次研究目的，同意参与并配合试验，全身健康状况良好，并符合以下要求：1）无糖尿病、心血管疾病、类风湿疾病等全身系统性疾病，无其他系

5、统感染；2）近半年内未接受过牙周治疗，近3个月内未服用过抗生素、免疫抑制剂等药物；3）女性未处于妊娠期、哺乳期、月经期；4）咬合关系正常，无正畸治疗史；5）无长期吸烟和酗酒史。1.2试验方法1.2.1SFRP1在龈沟液中的质量浓度用专用标准滤纸条采集研究对象的龈沟液。采集部位为右下颌第一磨牙的龈沟或牙周袋内6个位点（颊侧远中、颊侧中央、颊侧近中，舌侧远中、舌侧中央、舌侧近中）。检测所有研究对象的牙周临床指标，包括牙周探诊深度（probingdepth,PD）、CAL、龈沟出血指数（bleedingindex,BI）。采用酶联免疫吸附法测定龈沟液中S

6、FRP1的质量浓度。1.2.2SFRP1在牙周组织中的表达手术中取22例CP患者的病变牙龈组织（轻、中、重度CP组分别为7、7、8例）,10例对照组取手术切取的正常牙龈组织，固定包埋，切片，按照标准二步法进行SFRP1免疫组织化学染色，显微镜下观察并照相。SFRP1在牙龈组织中的表达使用着色强度积分进行评价[3],以有棕黄色颗粒状沉淀为阳性细胞，着色范围以阳性细胞记分。阳性细胞所占比例W1%记为0分，2%〜20%为1分，21%〜50%为2分，250%为3分；着色程度依据深浅记分，无着色为0分，浅着色为1分，深着色为2分。上述两项分值相加为着色强度积

7、分值：W1.9分为阴性（-）,2〜2.9分为弱阳性（+）,3〜3.9分为阳性（++）,$4分为强阳性（+++）。1.3统计学分析使用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。采用方差分析和LSD法分析各组龈沟液内SFRP1的质量浓度；Spearman相关分析法分析龈沟液内SFRP1质量浓度与CAL的关系；采用独立样本t检验、方差分析、Tukey分析法分析各组牙龈组织中SFRP1的表达。2结果2.1SFRP1在龈沟液中的质量浓度1.1.1CP组与对照组龈沟液中SFRP1质量浓度比较经独立样本t检验，CP组龈沟液的量及SFRP1质量浓度明显高于对照组（P

8、0.05）；其余各组间两两比较均有统计学意义，轻度CP组明显低于中度和重度组，同时，中度和重度CP组明显高于对照组，其差异