人乳头瘤病毒(hpv)16,-18,-58型单克隆抗体的制备分析及初步应用

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1、北京协和医学院硕_上毕Hk论文硕士学位论文人乳头瘤病毒(HPV)16，一18，-58型单克隆抗体的制备分析及初步应用所院：姓名：指导教师：学科专业：研究方向：完成日期：北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所刘艳春许雪梅教授病原生物学病毒疫苗2012．6．2】北京协和医学院硕上毕_p论文目录英文缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．2摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62附：已发表研究性论文首页⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7l致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．73学位论文版权使用授权书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．73北京协和医学院硕上毕Nk论文CVDMSOEDTAELISAFBSGFPHEPESHPVHRP

3、IPTGkDaLBmAbODOPDPAGEPBSPsVSDSTCIDsoTE11BMEDVLPs英文缩略词Columnvalue柱体积Dimethylsulphoxide二甲基亚砜Ethylenediaminetetraceticacid乙二胺四乙酸Enzyme．1inkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附实验Fetalbovineserum胎牛血清Greenfluorescentprotein绿色荧光蛋白N．2．hydroxyethylpiperazine—N’-2-ethoneulfN-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺oniEcacid酸Hum

4、anpapillomavirus人乳头瘤病毒Horseradishperoxidase过氧化物酶Isopropylthio．D．D．galactoside异丙基-D—D-硫化半乳糖苷Kilodalton千道尔顿LuriabertaniLB培养基Monoclonalantibody单克隆抗体Opticaldensity光密度Ortho．phenylenediamine邻苯二胺Polyacrylamidegelelectrophoresis聚丙稀酰胺凝胶电泳Phosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液Pseudovirus假病毒Sodiumdodecy

5、lsulfate十二烷基磺酸钠Tissuecultureinfectiousdose50组织半数感染剂量TrisEDTAbufferTE缓冲液N，N，N，，N，．tetramethylethlenediamine四甲基乙二胺Virus．1ikeparticles病毒样颗粒2㈣8㈣3哪3帅0岫4洲3㈣2洲Y北京协和医学院硕士毕_p论文摘要在全球范围内，宫颈癌是妇女第二位高发的恶性肿瘤。我国是宫颈癌的高发区，在经济落后地区，宫颈癌的危害更为严重。慢性高危型人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPv)的感染是宫颈癌的主要诱因。此外，低危型HPV中的H

6、PV．6，．1l可诱发90％的生殖器疣。在世界范围内，高危型HPV．16、．18是位居前两位的优势流行病毒株，诱发约70％的宫颈癌。在我国，除HPV．16，一18外(检出率分别为58．7％和11％)，高危型HPV．58的检出率也很高(7．2％)，居于第三位。因此，针对HPV．16，．18，．58疫苗的相关研究值得重视。目前国外已有两种HPVL1病毒样颗粒(Virus．1ikeparticles，VLPs)疫苗上市，分别是Merck公司利用酵母表达体系生产的含四价疫苗(HPV．16、．18、．6、．1lL1VLPs)，及GSK公司利用杆状病毒．昆虫细胞表达生产的二

7、价疫苗(HPV一16、．18LlVLPs)。临床实验结果显示，两种疫苗均具有很好的安全性、免疫原性及保护性，而且疫苗的免疫保护活性与疫苗接种血清中和抗体的水平具有很好的相关性。由于HPV感染严格限制在人的上皮组织、生活周期为上皮分化依赖的，体外难以大量培养获得病毒颗粒，缺乏有效的动物模型，因此准确评价疫苗接种人群后诱发的血清中和抗体水平存在很大的困难。另外，和大多数基因工程蛋白不同，HPVL1VLPs属于高度组装的重组蛋白，诱发的保护性抗体识别的表位大多是Ll蛋白构象依赖的。变性或错误折叠的L1蛋白不具有保护活性，其越接近天然病毒，保护活性越高，因此在疫苗研制过

8、程中需要对体外表达获得的