ap-2α在烟雾暴露所致血管内皮细胞凋亡中作用及机制的研究

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1、中文摘要研究背景：慢性阻塞性肺疾病(COPD)是严重影响人类健康的常见多发病，患病人数多，死亡率高，社会经济负担重，是全球性公共卫生问题。该病发病机制未完全明了，且无理想的治疗方法。烟雾暴露是COPD的重要致病因素。除慢性气道和肺部炎症、蛋白酶／抗蛋白酶失衡以及氧化／抗氧化失衡等学说外，肺间隔细胞凋亡在COPD发生发展中的作用日益受到重视，且与上述学说有千丝万缕的联系。肺间隔细胞凋亡的累积效应将导致肺气肿的发生和呼吸功能的降低，导致呼吸衰竭的发生。因此，干预肺间隔细胞凋亡是目前COPD防治研究中的一项重要课题。转录因子活化蛋白一2(transcriptionfactoractivatorpro

2、tein一2，AP-2)家族是一组发育调节，维甲酸诱导的基因DNA结合蛋白，AP-2a(transcriptionfactoractivatorprotein一2a，AP一2a)是最早被鉴定和研究的AP．2家族成员，参与了许多基因的表达如VEGF、p53、p21WAF／CIP、Bcl．2、锰过氧化物岐化酶(Manganesesuperoxidedismutase，MnSOD)等；参与了脊椎动物细胞黏附、生长、凋亡、组织分化、胚胎发育、肿瘤发生等病理生理过程。其中大部分研究集中在AP．2a对增殖凋亡的调控上。依据细胞类型及实验条件的不同，AP．2a分别发挥促凋亡或促增殖的作用。但是，在烟雾暴露所

3、致的COPD大鼠肺组织及香烟提取物(CSE)刺激的人脐静脉内皮细胞株ECV304中AP．2a是否表达，是否对烟雾暴露引起的细胞凋亡及Caspase．3的活化有影响，其机制是否与其激活结构域有关等等，尚无相关报道。l博上学位论文中文摘要目的：研究熏烟所致COPD大鼠肺组织中肺间隔细胞的凋亡情况及AP一2Q的表达水平；进一步通过细胞实验研究AP-2Q对CSE诱导的ECV304凋亡的影响及机制。方法：采用被动吸烟80天的方法复制大鼠COPD模型，采用TUNEL法检测肺组织细胞凋亡、Westernblot法检测肺组织中活化的Caspase一3、免疫组织化学及Westernblot法检测胞核中AP-2Q

4、蛋白的表达；通过MTT、Hoechst染核、Westernbtot等方法研究CSE对ECV304增殖、凋亡、Caspase一3和AP一2Q表达的影响；通过腺病毒介导的转染、Hoechst染核、Westernblot等方法研究过表达AP-2Q对CSE诱导的ECV304凋亡、Caspase-3活化的影响。采用质粒介导的转染、Hoechst染核、Westernblot等方法研究过表达AP-2Q的突变体AP-2△(只具有结合结构域，而没有转录激活结构域)对CSE诱导的ECV304凋亡、Caspase一3活化的影响。数据以均数±标准差(X_-／-s)表示，用Bartlett法进行方差齐性检验，两组间比较

5、用凇验，多组间比较用单因素方差分析，多个样本均数的多重比较用zsp-t检验。多个样本率的比较用Z检验。结果：研究发现，烟雾暴露80天成功复制了COPD大鼠模型，表现为炎症细胞浸润，肺泡腔扩大，FEV¨／Fvc降低，肺间隔细胞凋亡增多，Caspase一3活化增加；同时AP-2Q蛋白表达增加。在csE束U激的ECV304细胞中，细胞凋亡增多，AP-2Q表达增加；AP一2Q的过表达可抑NcsE诱导的ECV304细胞凋亡，表现为细胞凋亡率降低和Caspase一3的活性片段(17KD)减少。AP一2A瞬时转染ECV304细胞并Ⅱ中文摘要使其过表达后对基础及CSE诱导的细胞凋亡、Caspase-3的活化没

6、有明显影响。结论：AP-2CI在烟雾暴露法复制的COPD大鼠肺组织及CSEN激的ECV304细胞中表达增加。在CSE束U激的ECV304细胞中，AP-2Q抑NCSE诱导的Caspase一3的活化及细胞凋亡，其作用需要其激活结构域存在。AP一2Q可能参与了COPD的发生发展。关键词：AP一2Q，香烟提取物，COPD，血管内皮细胞，凋亡儿l博士学位论文英文摘要ABSTRACTBackgroundChronicObstructivePulmonaryDisease(COPD)isoneofpublichealthproblemsforitshighmorbidityandmortality,buti

7、tspathogenesisremainsenigmaticandthereisnogoodwaytotreatit．CigarettesmokeisonemajoretiologicfactorofCOPD．Besideschronicinflammation、theelastase／antielastaseimbalancetheoryandoxidant／antioxidantimbalan