携人血栓调节蛋白基因慢病毒载体的构建及其在内皮祖细胞中的表达

《携人血栓调节蛋白基因慢病毒载体的构建及其在内皮祖细胞中的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、隶。轫大◆粤硕士学位论文万方数据携人血栓调节蛋白基因慢病毒载体的构建及其在内皮祖细胞中的表达研究生姓名：赵国蝰万方数据IIIIIIIIIIIIIIlY2706284CONSTRUCTIONOFLENTIVIRALⅦCTORCONTAININGHUMANTHROMBOMODULINGENEANDITSEXPRESSIONINENDOTHELIALPROGENITORCELLSOFRABBITSAThesisSubmittedtoSoutheastUniVersityFortheAcademicDegreeofMasterofMedici

2、neBYZHAOGuo—fengSupervisedbyProf．DENGGangDepartmentofMedicalImagingandNuclearMedicineMedicaISchooIofSOutheastUniVersityApril2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他入己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志

3、对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：习蝉日期：二邕业_出口东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括以电子信息形式刊登)论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布(包括以电子信息形式刊登)授权东南大学研究生院办理。万方数据中文摘要摘要携人血栓调节蛋白基因慢病毒载体的构建及

4、其在内皮祖细胞中的表达研究生：赵垦坚导师：墅塑东南大学医学院目的构建携带人血栓调节蛋白(hTM)基因的慢病毒表达载体(plenti6．3．hTM．IRES．EGFP)，体外转染兔外周血内皮祖细胞(EPCs)并观察其在EPCs中的表达及对内皮祖细胞生物功能的影响。方法从重组质粒pcDNA3．1／hTM中提取hTM并采用DNA重组技术将hTM基因导入pLenti6．3．MCS-IRES—EGFP慢病毒表达载体中，筛选出阳性克隆与慢病毒包装系统共转染293T细胞产生病毒颗粒；采用密度梯度离心法分离兔外周血中内皮祖细胞；将内皮祖细胞分为实验组

5、、病毒对照组及空白对照组；实验组与病毒对照组分别转染plenti6．3-hTM—IRES-EGFP和pLenti6．3一MCS—IRES—EGFP；空白对照组内皮祖细胞仅加入PBS作观察；流式细胞仪法检测plenti6．3-hTM．IRES—EGFP转染效率，转染72h后用激光共聚焦显微镜观察增强型绿色荧光蛋白表达情况，利用Q—PCR及Westernblot法检测细胞中mRNA及hTM蛋白的表达；Dil—ac．LDL和FITC．UEA．1双荧光法鉴定EPCs；利用MTT法、transwell小室法检测各组细胞增殖及迁移活性。结果基因测

6、序及Westernblot法证实重组慢病毒载体plenti6．3．hTM．IRES．EGFP构建成功。plenti6．3．hTM—IRES—EGFP转染EPCs72h后，绿色荧光蛋白表达率超过90％，流式细胞仪测定hTM阳性EPCs达92．9％，Q．PCR及Westernblot显示转染组EPCshTMmRNA及蛋白表达呈明显阳性，转染组hTMmRNA表达明显高于对照组。实验组、病毒对照组及空白对照组EPCs的增殖及迁移活性无统计学差异。结论成功构建plenti6．3一hTM．IRES．EGFP重组慢病毒表达载体，转染兔外周血EPCs

7、后，在体外能高效表达基因产物且不影响EPCs的生物学功能，为进一步研究hTM在动脉血栓疾病中的作用奠定了实验基础。万方数据东南大学硕士学位论文【关键词】血栓调节蛋白；慢病毒；内皮祖细胞；基因表达；再狭窄II万方数据英文摘要ConstructionoflentiviralvectorcontaininghumanthrombomodulingeneanditsexpressioninendothelialprogenitorcellsofrabbitsMASTERCANDIDATE：ZHAOGuo-fengDIRERTOR：QE丛鱼鱼鱼

8、DgFROM：MedicalSchoolofSoutheastUniversityobjectiveT11isstudyisdesignedtoconstructthelentiviralvectorcontaining