小鼠fam134b基因慢病毒表达载体的构建

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1、２０１７（０３上）：５－８，２８８小鼠ＦＡＭ１３４Ｂ基因慢病毒表达载体的构建１２１１罗，李虎，林亚秋，钟红梅（１．西南民族大学生命科学与技术学院，成都６１００４１；２．新乡医学院，河南新乡４５３００３）中图分类号：Ｓ８５２．６５；Ｑ７８６文献标识码：Ａ文章编号：１００４－７０３４（２０１７）０３－０００５－０５关键词：ＦＡＭ１３４Ｂ基因；超表达；ｓｈＲＮＡ；慢病毒；ｑＰＣＲ摘要：为了应用基因重组技术，构建小鼠ＦＡＭ１３４Ｂ基因慢病毒超表达和短发夹（ｓｈＲＮＡ）载体，试验根据ＧｅｎＢａｎｋ上登录的小鼠ＦＡＭ１３４

2、Ｂ基因序列设计引物，扩增该基因开放阅读框（ＯＲＦ）序列，并克隆到酶切的ＦＵＧＷ载体，同时设计３对ＦＡＭ１３４Ｂ－ｓｉＲＮＡ序列克隆到酶切的ＰｓｉｃｏＲ载体，将获得的重组质粒与包装质粒（ＰＳＰＡ和ＰＭＤ２Ｇ）共转染２９３Ｔ细胞包装成病毒颗粒，感染体外培养的３Ｔ３－Ｌ１前体脂肪细胞，实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）检测ＦＡＭ１３４Ｂ基因的超表达及干扰效果。结果表明：重组质粒ＦＵＧＷ－ＰＧＣ－１α－ＧＦＰ及ＰｓｉｃｏＲ－ＦＡＭ１３４Ｂ－ＧＦＰ测序验证成功，包装后感染３Ｔ３－Ｌ１前体脂肪细胞发现该基因被成功超表达和干扰。说

3、明成功构建小鼠ＦＡＭ１３４Ｂ慢病毒超表达和干扰载体，可为该基因在脂代谢中的作用提供重要的工具。ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｏｆｍｏｕｓｅＦＡＭ１３４Ｂｇｅｎｅ１２１１ＬＵＯＦａｎ，ＬＩＨｕ，ＬＩＮＹａｑｉｕ，ＺＨＯＮＧＨｏｎｇｍｅｉ（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｆｏｒＮａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００４１，Ｃｈｉｎａ；２．ＸｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ

4、ｎｘｉａｎｇ４５３００３，Ｃｈｉｎａ）Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＦＡＭ１３４Ｂｇｅｎｅ；ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｓｈＲＮＡ；ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ；ｑＰＣＲＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒａｎｄｓｈｏｒｔｈａｉｒｐｉｎＲＮＡｖｅｃｔｏｒｏｆｍｏｕｓｅＦＡＭ１３４Ｂｇｅｎｅｕｓｉｎｇｇｅｎｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｔｈｅｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｍｏｕｓｅＦＡＭ１３４Ｂｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎ

5、ｃｅｒｅｇｉｓｔｅｒｅｄｉｎＧｅｎＢａｎｋ．Ｔｈｅｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）ｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＦＡＭ１３４ＢｇｅｎｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｄｉｇｅｓｔｅｄＦＵＧＷｖｅｃｔｏｒ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，３ｐａｉｒｓｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅｓｆｏｒＦＡＭ１３４Ｂ－ｓｉＲＮＡｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏＰｓｉｃｏＲｖｅｃｔｏｒ．ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｓａｎｄｔｈｅｐａｃｋｅｄｐｌａｓｍｉｄｓｏｆＰＳＰＡａｎｄＰＭＤ２Ｇｗｅｒｅｃｏ－ｔ

6、ｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏ２９３Ｔｃｅｌｌｓａｎｄｐａｃｋａｇｅｄｉｎｔｏｖｉｒｕｓｐａｒｔｉｃｌｅｓｔｏｉｎｆｅｃｔ３Ｔ３－Ｌ１ｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏ．Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ（ｑＰＣＲ）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＦＡＭ１３４Ｂｇｅｎｅａｎｄｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｅｆｆｅｃｔ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｆｏｒｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ

7、ｐｌａｓｍｉｄｓＦＵＧＷ－ＰＧＣ－１α－ＧＦＰａｎｄＰｓｉｃｏＲ－ＦＡＭ１３４Ｂ－ＧＦＰｗａｓｖａｌｉｄａｔｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ，ａｎｄｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅＦＡＭ１３４Ｂｇｅｎｅｗａｓｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｎｄｉｎｔｅｒｆｅｒｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙａｆｔｅｒｔｈｅｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｏｆＦＡＭ１３４Ｂｇｅｎｅｗａｓｐａｃｋｅｄｔｏｉｎｆｅｃｔｔｈｅ３Ｔ３－Ｌ１ｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈａｔｔｈｅｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｏｖｅｒ－

8、ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒａｎｄｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｖｅｃｔｏｒａｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ，ａｎｄｉｔｃａｎｐｒｏｖｉｄｅａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｏｌｆｏｒｔｈｅｒｏｌｅｏｆＦＡＭ１３４Ｂｇｅｎｅｉｎｔｈｅｆａｔｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．ＦＡＭ１３４Ｂ（ｆａｍｉｌｙｗｉｔｈｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ１３４，ＦＡＭ１３４Ｂ基因的表