二烯丙基二硫下调limk1抑制人胃癌细胞增殖、迁移及侵袭

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1、分类号密级UDC编号硕士学位论文二烯丙基二硫下调LIMK1抑制人胃癌细胞增殖、迁移及侵袭研究生姓名：马艳华指导教师姓名、职称：苏琦教授学科、专业名称：病理学与病理生理学研究方向：胃癌发生与防治的分子机制研究2013年4月南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律

2、结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读硕（博/硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同

3、意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：导师签名：年月日年月日本研究基金资助项目1、国家自然科学基金306002852、湖南省自然科学基金07JJ30333、湖南省教育厅科学研究重点项目09A0774、湖南省科技厅科技计划2008SK30105、湖南省高校创新平台开放基金09K0746、湖南省卫生厅科研课题计划项目B2008-067目录一、中文摘要……………………………………………………1二、英文摘要……………………………………………………3三、

4、前言………………………………………………………….6四、正文………………………………………………………….91.材料与方法……………………………………………………..92.结果………………………………………………………….…163.讨论………………………………………………………………28五、结论……………………………………………………………33六、参考文献……………………………………………………...34七、综述……………………………………………………………38八、在读硕期间发表的论文……………………………………..47九、主要英文缩略语索引………………………

5、………………..48十、致谢…………………………………………………………49二烯丙基二硫下调LIMK1抑制人胃癌细胞增殖、迁移及侵袭中文摘要目的：我们先前证明二烯丙基二硫（diallyldisulfide，DADS）可明显抑制人胃癌细胞增殖，并且蛋白质组学研究发现DADS诱导人胃癌MGC803细胞的差异蛋白质LIMK明显下调。近年来，LIMK1对肿瘤细胞的增殖和侵袭的意义引起了广泛关注。本研究旨在探讨DADS对人胃癌MGC803细胞LIMK1的表达及其信号通路的影响，以阐明其抗肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的分子机制。方法：DADS作用人胃癌MGC803细胞后，采用

6、MTT比色法检测对增殖影响；Transwell实验和划痕实验分别观察DADS对细胞侵袭和迁移能力的影响；免疫组化检测LIMK1的表达；RT-PCR、Westernblot分别检测Rac1、Rock1、Pak1、LIMK1、cofilin1和Destrin的mRNA与蛋白表达。结果：1.DADS对人胃癌MGC803细胞的增殖、侵袭和迁移具有抑制作用-1MTT法检测结果显示，30mg·LDADS作用MGC803细胞24h、48h、72h、96h后，其吸光度值比对照组低，而且随时间增加逐渐降低(P<0.05)；随着时间增加，DADS对癌细胞增殖的抑制率逐渐增加，依次

7、为31.8%，66.1%，83.6%，89.2%(P<0.05)，表明DADS对人胃癌细胞具有明显的生长抑制作用，且呈显著的时间-效应依赖关系（P<0.05）。-1划痕实验结果显示，10、20、30、40、50mg·LDADS分别作用MGC803细胞，取0小时和24小时观察划痕愈合情况，对照组划痕愈合显著快于DADS处理组，证明细胞的迁移能力被抑制，呈剂量-效应依赖关系（P<0.05）。Transwell-1实验结果显示，10、20、30、40、50mg·LDADS分别作用MGC803细胞24h后，随机取10个高倍视野进行穿过基质胶的细胞计数，处理组分别为35

8、.8±3.74、134.1±2.02、