rna干扰limk1对dads抑制人胃癌mgc803细胞迁移与侵袭的作用

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1、分类号密级UDC编号硕士学位论文RNA干扰LIMK1对DADS抑制人胃癌MGC803细胞迁移与侵袭的作用研究生姓名：章硕指导教师姓名、职称：姜浩教授副导师：苏琦教授学科、专业名称：肿瘤学研究方向：胃癌发生与防治的分子机制研究2012年5月万方数据南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。

2、与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读硕（博/硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖

3、南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：导师签名：年月日年月日万方数据目录一、中文摘要……………………………………………………1二、英文摘要………………………………………………3三、前言…………………………………………………………6

4、四、正文…………………………………………………………91.材料与方法……………………………………………………92.实验结果…………………………………………………………193.讨论………………………………………………………………32五、结论……………………………………………………………35六、参考文献……………………………………………………36七、综述……………………………………………………………40八、在读硕期间发表的论文……………………………………50九、英文缩略语索引…………………………………

5、……51十、致谢…………………………………………………………52万方数据本研究基金资助项目1、国家自然科学基金310006292、国家自然科学基金811028543、国家自然科学基金311009354、国家自然科学基金811003755、湖南省自然科学基金07JJ30336、湖南省高校创新平台开放基金09K0747、湖南省卫生厅科研课题计划项目B2008-0678、湖南省教育厅科学研究重点项目09A0779、湖南省科技厅科技计划2008SK3010万方数据RNA干扰LIMK1对DADS抑制人胃癌M

6、GC803细胞迁移与侵袭的作用研究生：章硕导师：姜浩教授苏琦教授中文摘要目的：研究证明，LIMK（Limkinase）是调控细胞骨架结构发生改变的重要分子之一，在肿瘤细胞侵袭转移中的作用得到研究者广泛的关注。本实验室前期蛋白质组学检测二烯丙基二硫（diallyldisulfide，DADS）处理人胃癌MGC803细胞后，LIMK下降。且证明DADS可通过下调LIMK1抑制人胃癌MGC803细胞迁移侵袭，本研究旨在探讨RNA干扰LIMK1对DADS抑制人胃癌MGC803细胞迁移侵袭的作用，以阐明LI

7、MK1是抗肿瘤细胞转移和侵袭的重要分子。方法：RNA干扰人胃癌MGC803细胞LIMK1，RT-PCR和Westernblot检测干扰效率；细胞划痕和transwell实验分别检测干扰LIMK1和DADS对人胃癌MGC803细胞迁移与侵袭能力的影响；Westernblot检测Rac1、Rock1、Pak1、LIMK1、cofilin1、p-cofilin1蛋白水平表达。结果：1、pcDNA6.2/LIMK1-miRNA/MGC803重组细胞的构建四组pcDNA™6.2-GW/EmGFPmiR-LI

8、MK1干扰质粒及阴性干扰质粒琼脂糖电泳跑胶呈马蹄形，表示质粒提取成功。将提取的5组干扰质粒分别转入MGC803细胞，倒置荧光显微镜下可见细胞发绿色荧光。Westernblot结果显示，与未转染组相比，转染LIMK1-miRNA1-4分别使MGC803细胞LIMK1蛋白表达水平下降30%、28%、72%、75%，LIMK1-miRNA4转染组LIMK1蛋白表达抑制最明显（P<0.05），阴性转染组与未转染组相比之间无统计学意义（P>0.05）。RT-PCR结果显示，LIMK1-miR