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《蚜虫基因组dna提取方法的改进》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、·880·昆虫知识 ChineseBulletinofEntomology200643(6)3蚜虫基因组DNA提取方法的改进33杨子祥 陈晓鸣 冯 颖 缪迎春(中国林业科学研究院资源昆虫研究所 云南昆明 650224)33MethodimprovementforextractiongenomicDNAfromaphids.YANGZi2Xiang,CHENXiao2Ming,FENGYing,MIAOYing2Chun(ResearchInstituteofResourceInsects,ChineseAcademyofForestry,KunmingYunnan650224,
2、China)AbstractThetraditionalSDSmethodwasmodifiedfortheisolationofthegenomicDNAfromaphidswithsmallbodyandsurfacecoveredbyexoskeleton.ComparedwiththetraditionalSDSmethod,thissimpleandeffectivemethodavoidsgrindingtissueandissuitablefortheextractionofDNAfromsingleaphid.GenomicDNApreparedbythisne
3、wmethodissuitableforPCRamplificationusingRAPDrandomprimersandsequencingprimers.Keywordsaphid,genomicDNA,extraction,improvement摘 要 蚜虫基因组DNA的提取是蚜虫分子生物学研究中的难点。参照动物基因组DNA的提取方法,根据蚜虫体型微小,体表有外骨骼的特点,对SDS法作了改进。改进的方法无需用组织捣碎棒破碎虫体,操作简便。与现在常用的提取方法相比,改进的SDS法能快速、有效地提取单头蚜虫的基因组DNA,适用于RAPD随机引物和测序引物的PCR扩增。关键词
4、蚜虫,基因组DNA,提取方法,改进 运用分子生物学技术从核酸水平研究昆虫信息含量丰富等优点,非常适合于蚜虫的研[7]的分类和鉴定、生物型的识别、遗传多样性分析究。蚜虫基因组DNA的提取是开展蚜虫分等,是现代昆虫分子系统学和昆虫遗传学的研子遗传学研究的难点,Black等采用了SDS法提[8]究热点之一,开展这类研究的基础工作是基因取蚜虫基因组DNA并用于RAPD扩增;杨效[1]组DNA的提取。在昆虫分子遗传学研究中,文等在烟蚜Myzuspersicae(Sulzer)的研究中采[9]由于研究的样本量较大,除了要获得质量和数用KAC法提取烟蚜的DNA;安瑞生等对KAC[10]量合
5、乎要求的DNA外,还需要提取方法简便易法做了改进;以后的蚜虫研究人员大多采用[2][11]行,容易掌握,成本较低。这种方法。近十几年来,蚜虫分子生物学研蚜虫是一类分布广,寄主广泛,经济价值较究有了较大的发展,但对蚜虫DNA提取方法进[3]高的昆虫,世界上已知种类为4000多种,我行探索和比较的研究较少。[4]国已报道的种类1000余种。蚜虫大多数是本试验尝试和比较了上述几种方法,并以[12]害虫,它们刺吸植物汁液,直接影响植物生长,动物基因组DNA的提取方法为基础,根据蚜同时间接传播病毒病害,造成农业上的损失,如虫体型微小,体表有几丁质外骨骼的特点,对棉蚜Aphisgossyp
6、ii、麦长管蚜MacrosiphumavenaeSDS法作了改进,改进的方法无需用组织捣碎等;少数种类如五倍子蚜虫(倍蚜)是重要的资棒破碎虫体,操作简便,能快速、有效地提取单[5]头和多头蚜虫的基因组源昆虫,具有较高的经济价值。蚜虫身体微DNA。小,形态特征不显著,生活习性复杂,并具有多型多态现象,在分类和鉴定、近缘种的识别等方[6]3科技部基础性研究项目(2000DEB100035)。面,传统的研究方法往往难以发挥作用。分33通讯作者子遗传标记具有稳定性高、受环境条件影响小,收稿日期:2005212227,修回日期:2006201212200643(6)昆虫知识 Chines
7、eBulletinofEntomology·881·心管中,加入100μL匀浆液(按A液∶B液∶C液1 材料和方法=8∶1∶1配制。其中A液:Tris2Base0105molP111 材料的来源L,NaCl011molPL,EDTA011molPL,pH=716;B供试倍蚜样品中除肚倍蚜采自陕西西乡液:5%的SDS;C液:2mgPmL蛋白酶K),用与处,其余均采自四川蛾眉(表1)。在野外采集离心管配套的组织捣碎棒充分研磨,再加入相隔115m以上、接近成熟但尚未爆裂的倍子,500μL匀浆液。4
