基因组dna提取方法及进展

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1、万方数据上—星堕芏监壁垒壶!Q业至璺l!鲞蔓§堂ilt些gl·!』ufMrrI文章编号：IilOl2087(2002)060379．113中围分类号：078I文献标识码：A基因组DNA提取方法及进展王龙武1。二，徐克前二，罗识奇I(1湖南省临床检验巾心，长沙410008；2中南大学湘雅医学院检验系，长沙410008)关键词：譬H细I)NA；提取随着分于牛物学技术的屯速发罹．基冈分析血临床上的啦用fI趋广泛．日动化程度极高的分析仪器相继问f}f-使基罔分柝枝术领域得刮迅速发展．但作为基因分析的关键步骤剧甚同组DNA

2、提上Il(和纯化直足耗时．繁琐的过程，f{自动ft槲度小高，严电减慢J’基因分析的谴度。基因组1)NA提且z和纯化^法的灵敏度、特芹胜直接影响基因分析的结粜所姒，许多学肯自托努力探索各种是山组DNA的提躯疗}士、·挂幽绀I)NA经帆提取法““外周血皋l叫_ellI)NA提取分为四个步嫌：1分离向细眦，采阡

3、FicnllI}yl州1㈣榔受离心分离外周血白细胞．般簋求mL样际奉丛^，通常需5、lOrnl，不适用于儿科病人。也“JjH仑血A摧注加低渗缓冲液破坏红细胞而保持白细胞形态或f帛斛细胞核完整，离心收集白细胞和绌

4、胞核。这种方}土HfmI譬小．操作桕对简便。2裂斛向细胞，用剐胞裂帮瑷川一澶裂觯I。1钏胞释放卅幕H组DNA。根据使用的细胞裂斜剂的小同仃I矗氯酸钠法、sI)s法、DAlB法、Nal法、昧豪提取珐厦KI?尢“等，加人蛋白酶K使蛋白厦分解，肯I‘j脚K价恪F_5炙“学占“用胰蛋向腑代替篮一酶K啊样取缁J+满意的钻果；3有机溶剁抽捉，用酚／氙仿进行椭提』际置¨睫与m红素等杂质；4沉淀分离bNA．将卜进处删的】)NAf口二阵沉淀或透忻等力法进步纯化，1)N、的纯慢祠j爵甘删定采川比包法，A紫外分光光度if}_jllll

5、．I；i1、Ih¨n。干¨A川_儿。值，DNA(双链)8-量为^刖Ⅶ。值、50州／i，1l一比乜日J的箭样倍数．I)NA(单链)含量为’___fA。4(If哔／rid＼比色时的稀释倍数、^!∽r

6、／，1Ⅷln．>l7盯纯度较““瑚。。／,4㈨。、>20表叫含酚杂质少、蚺¨小IJN^。t阻的提取^法只仃提取的I)NA?屯腹l斜纸i

7、1I知廊引乐昔杂赝少旧f圮点．盲作为1)NA提取的常姚办浊，丌这种方法操作步蟓复杂，耗时长．小能在吲试铂内，Z成提嫩过稃翳造成样本之间的交义污染．贱留九IJ＼＼济湫r1，的附类等有机物质

8、jJDNA聚台酶有抑制作f玎{5圳jt^I，‘、】t"1J曾过程tlI会对扩增过程产，F抑制作川，j卟册飙fO抖脱孵等相机溶剖特造成环境污染自m操竹齐住堇啦．f出改万珐的虚”j受刊定的局m件、强㈧r【l1)NA怍Tl机溶刺提取法1。‘l¨仉滓缓冲淑破坷、}I细胞后离心收集白细胞厦纲胞桉．用细胞裂解}随他白细胞释放I)NA用蛋白酶K【“、蚩自酶一‘、蛋白酶K和梭糖枝酸酶和强碱(NaOH或KOH)I“等对蛋白质和RNA进行允分消化分解。在高盐的条件下用乙醇直接沉淀分离纯化DNA。避免r他用有毒作用的有机溶剂，提取的D

9、NA纯度较高，A驯Ⅲ／AⅢh．．选纠I8【Ir．DNA提胞效率高，可达20一28ftg／ml。但篮白酶对蛋白质消化需要很长时I'uj或需苜高韫条件下进行消化，给临床J世用．特别是常规应用带来了～定的射难，三、以一氧化硅为同相吸附剂的基出组I)NA提取涪姒二氧化砗作固丰日吸附剂提取DNA的作用机理：在pH值等卜或低于二氧化吐表面Pka值的高离f强度缓冲液中．■氧化硅表向的负电苘减少，I)NA分子箝，白的负电荷与一氧化硅表面产生的排斥力减小。形成了大量的水台离干，DNA分r的水合程度降低而被驱使秉☆到二氧化耐：n0表

10、面J，。同时细胞裂解剖也丁扰双链DNA分子问的氢健形成而产生单链DNA分，．DNA单链分子与一氧化硅表向形成氢键，这种氢键力远大于I)NA分子与一氧化辞丧面的静电排斥力，如鬃pH值低f⋯氧化硅表面I，ka值，这种静电排斥山会更小，这样人大促进二氧化硅表面对DNA分了：的吸刚能力。但pH值太低会影响蛋白质和脂质的nr溶性，产生沉淀T扰实验，所以该宴啼成功的关键是维持情当的囊验条什(pH67)⋯J。吸附仃】jNA分子的～氧化硅用洗涤液洗掉啦附在二氧化硅表f『『『的其它杂质，用p¨值高丁f，Ka的仳离子强度缓冲泄(“I

11、80)洗脱啦附在～氟『七硅表向上的I)NA分子．即提供各刊-分r生物学试验用浚法能直接从生物样t甘I}，提取基因组DNa,简单快速许多“一氧化硅为同}日吸附柑料f一基同绀DNA的提取厅城相继问世【”1。、vngPlstritl川报告用玻璃粉直接从琼脂糖凝胶中提取DNA、而Mark。”用玻璃粉吸附据取质村DNA、浚法的基本操作步骤：基因组T)NA在高离于嘱J董的条件l、，被